Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami. Metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu.
Poslední úprava: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (17.12.2024)
Students will become familiar with basic biochemical methods. A method that has wide application in biochemistry is gel chromatography, students separate a protein from a mixture or determine the relative molecular mass of an unknown protein. Separation of proteins and determination of relative molecular mass is also performed by electrophoresis in polyacrylamide gel in the presence of SDS. Great attention is paid to the principles of working with enzymes: determination of specific enzyme activity, determination of enzyme affinity for the substrate, determination of maximum reaction rate, pH optimum, monitoring of the reaction time course and the influence of inhibitors and activators on the enzyme reaction. The presence of isoenzymes is demonstrated on the example of lactate dehydrogenase, which students separate in a polyacrylamide gel under native conditions and detect enzyme activity in the gel.
Poslední úprava: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (17.12.2024)
Literatura -
https://www.natur.cuni.cz/chemie/biochem/ke-stazeni/biochemicke-praktikum Laboratorní cvičení z biochemie, editoři: Doc. RNDr. M. Kodíček, CSc. a Doc. RNDr. O. Valentová, CSc.; Praha 2000
Poslední úprava: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (30.09.2016)
Poslední úprava: Hýsková Veronika, RNDr., Ph.D. (05.10.2015)
Požadavky ke zkoušce
- práce na úloze bude umožněna jen studentům, kteří prokážou dostatečné porozumění principům - před odchodem je nutné nahlásit získané výsledky - vytištěný protokol odevzdat nejpozdeji na začátku příštích praktik, jinak úloha propadá - po případné dohodě s dozorem praktik je možné odevzdat elektronickou verzi protokolu, poslat emailem nejpozději 24 h (soboty, neděle a svátky se nepočítají) před konáním dalších praktik - v případě oprav musí být protokol bez vad schválen do tří týdnů od vypracování úlohy - k zápočtovému testu může scházet nejvýše jeden protokol - pro získání zápočtu je třeba absolvovat prezentaci vybrané úlohy splnit podmínky závěrečného testu odevzdat protokoly ke všem úlohám vrátit klíč od skříňky na chodbě
Poslední úprava: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (22.09.2020)
Sylabus -
Studenti vypracují vždy jednu úlohu z následujících okruhů úloh:
1. Izolace proteinu s enzymovou aktivitou a stanovení specifické aktivity
2. Gelová chromatografie
3. Separace proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v prostředí SDS a stanovení relativní molekulové hmotnosti těchto proteinů
4. Sledování afinity enzymu k substrátu - určení Michaelisovy konstanty a maximální rychlosti reakce
5 Určení pH optima, sledování vlivu inhibitorů a aktivátorů na aktivitu enzymu, časový průběh enzymové reakce, detekce enzymové aktivity v polyakrylamidovém gelu
6. Práce s DNA: Hledání pachatele trestného činu.
7. Ústní prezentace teorie a výsledků jedné úlohy.
Poslední úprava: Kavan Daniel, RNDr., Ph.D. (30.09.2016)
1. Isolation of a protein - enzyme, determination of specific activity
2. Gel chromatography of proteins (separation, relative molecular mass determination)
3. SDS - polyacrylamide electrophoresis (determination of relative molecular mass of proteins)
4. Practical enzymology - kinetic characteristics, Michaelis constants, maximal reaction rate, pH optimum, activation and inhibition of enzymes, electrophoretic separation of isoenzymes and detection of the enzyme activity in gel
5. Nucleic acids-Forensic DNA fingerprinting kit
6. Oral presentation of one experiment
Poslední úprava: Hýsková Veronika, RNDr., Ph.D. (05.10.2015)
