Základní laboratorní kurz seznamující s metodami experimentální biologie specificky používanými v parazitologii i v jiných experimentálních oborech. Předmětem praktik je mj. demonstrace a nácvik mikrobiologických/parazitologických kultivačních technik, manipulace s laboratorními hlodavci při experimentálních nákazách či imunizacích, axenizace a klonování prvoků, příprava nativních a trvalých preparátů pro diagnostiku a cytologii, izolace DNA, ELISA a PCR v diagnostice, příprava, značení a vyhodnocování preparátů pomocí nepřímé immunofluorescence, izolace rekombinantních proteinů, elektroforetické metody, metodiky práce s hmyzími přenašeči chorob aj. Předmět je vhodný především pro studenty 3. ročníku bakalářského studia, kteří plánují pokračovat v magisterském studiu na katedře parazitologie a ještě nemají extenzivní zkušenosti s prací v laboratoři.
Studenti musí mít během praktika laboratorní plášť.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Basic parasitological practical course demonstrating general as well as advanced and specific experimental laboratory methods including staining procedures (preparation and staining of blood smears according to Giemsa-Romanowski or using Dade Diff-Quik staining kit), handling of laboratory mice for the purposes of experimental infection or immunization, cultivation techniques (maintenance of axenic cultures, cell counting and cloning, growth and axenization experiments, calculation of growth parameters), immunological methods (ELISA, indirect immunofluorescence), DNA isolation, diagnostic PCR, isolation of recombinant protein, electrophoretic methods, work with inset vectors transmitting diseases, etc.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Literatura -
studenti dostávají (každý přítomný) na každém praktiku xeroxované návody k úlohám
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Požadavky ke zkoušce -
Aktivní účast na praktiku, maximálně 1 omluvená absence. V závislosti na průběhu praktik může být aplikován závěrečný zkušební test, jehož úspěšné splnění bude podmínkou zápočtu.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Active presence at the course is required. One justified absence is acceptable. Final test may be required, in relation to the performance of the students during the course.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Sylabus -
Technika suchých nátěrů, manipulace s laboratorní myší
- využití v diagnostice - test na přítomnost protilátek proti Toxoplasma gondii
PCR
- využití v diagnostice - test na přítomnost lidských patogenů/komensálů - detekce DNA na gelech - elektroforetické metody
Příprava a izolace rekombinantního proteinu
- práce s bakteriální kulturou, podmínky indukce a exprese cizorodého proteinu - izolace proteinu v nativní a denaturované formě afinitní chromatografií - analýza proteinového vzorku elektroforézou - elektroforetické metody
Experimentální sání na modelu Trypanosoma culicavium – Culex p. quinquefasciatus
-příprava kultury, počítání v komůrce, ředění kultury -deaktivace krve v teplé lázni, příprava krmítka s membránou -sání -pitva dříve nasátých komárů -fixace a barvení pozitivních preparátů
Fluorescenční barvící metody
- vitální barvení acridinovou oranží - jaderné barvení Hoechstem nebo DAPI - fluorescenční sondy citlivé k pH - značení FITC - imunofluorescence
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Staining methods, manipulation with laboratory mouse
- blood smear, thick drop
- staining of dry smears by Giemsy-Romanowski method
- fast staining by Dade Diff-Quik
- manipulation with laboratory mouse, infection with Trypanosoma brucei, Plasmodium berghei
Basic cultivation techniques
- preparation of antibiotic stock solutions
- isolation of the Tritrichomonas foetus axenic culture using a migration tube
- passage of axenic cultures, sterility test
- freezing techniques, cryopreservation of protozoa
Cloning
- Isolation of clones by dilution method (Tetrahymena pyriformis)
- isolation of clones by limiting dilution method (Trichomonas vaginalis)
- isolation of clones on agar plates (Crithidia fasciculata)
Quantitative work with protists
- Work with Burker's counting chamber
- calculation of cell concentration
- evaluation of the growth experiment, calculation of doubling time from growth curves
ELISA
- use in diagnostics
- test for the presence of antibodies against Toxoplasma gondii
PCR
- use in diagnostics
- PCR test for human pathogens / commensals
- DNA isolation methods
- DNA electrophoresis, visualization
Preparation and isolation of recombinant protein
- work with bacterial culture, conditions of induction and expression of foreign protein
- protein isolation in native and denatured form by affinity chromatography
- analysis of protein sample by electrophoresis
- electrophoretic methods
Fluorescent staining methods
- vital staining with acridine orange
- nuclear staining by Hoechst or DAPI
- pH sensitive fluorescent probes
- FITC labeling
- immunofluorescence on wet mounts
Work with insect vectors
- experimental blood feeding of mosquitoes
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (02.09.2024)
Výsledky učení -
Po absolvování praktického kurzu Parazitologické laboratorní techniky budou studenti schopni bezpečně a samostatně aplikovat základní laboratorní postupy specifické pro experimentální parazitologii a příbuzné obory, včetně mikrobiologických a parazitologických kultivačních technik, axenizace a klonování prvoků, přípravy nativních i trvalých preparátů pro diagnostiku a cytologii, izolace DNA, provádění ELISA a PCR metod v diagnostickém kontextu, nepřímé imunofluorescence pro detekci antigenů, izolace rekombinantních proteinů, elektroforetických separací a práce s hmyzími přenašeči nemocí. Absolventi získají dovednosti manipulace s laboratorními hlodavci při experimentálních nákazách a imunizacích, včetně etických a bezpečnostních principů. Studenti budou schopni kriticky vyhodnocovat výsledky experimentů, identifikovat potenciální chyby a navrhovat optimalizace protokolů, což jim umožní úspěšně pokračovat v pokročilejším magisterském výzkumu na katedře parazitologie i bez předchozích extenzivních laboratorních zkušeností.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (29.01.2026)
After completing the practical course in Parasitological Laboratory Techniques, students will be able to safely and independently apply basic laboratory procedures specific to experimental parasitology and related fields, including microbiological and parasitological culture techniques, axenization and cloning of protozoa, preparation of native and permanent preparations for diagnostics and cytology, DNA isolation, performing ELISA and PCR methods in a diagnostic context, indirect immunofluorescence for antigen detection, recombinant protein isolation, electrophoretic separation, and working with insect disease vectors. Graduates will acquire skills in handling laboratory rodents during experimental infections and immunizations, including ethical and safety principles. Students will be able to critically evaluate experimental results, identify potential errors, and propose protocol optimizations, enabling them to successfully pursue more advanced master's research at the Department of Parasitology even without prior extensive laboratory experience.
Poslední úprava: Hrdý Ivan, doc. RNDr., Ph.D. (29.01.2026)
