Buňky a tkáně in vitro - MB150P23

• Anglický název: Cells and Tissues in vitro
• Zajišťuje: Katedra buněčné biologie (31-151)
• Fakulta: Přírodovědecká fakulta
• Platnost: od 2010 do 2013
• Semestr: zimní
• E-Kredity: 3
• Způsob provedení zkoušky: zimní s.:
• Rozsah, examinace: zimní s.:1/2, Z+Zk [HT]
• Počet míst: 80
• Minimální obsazenost: neomezen
• 4EU+: ne
• Virtuální mobilita / počet míst pro virtuální mobilitu: ne
• Stav předmětu: vyučován
• Jazyk výuky: čeština
• Poznámka: povolen pro zápis po webu
• Garant: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D.
• Vyučující: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D.

Anotace

čeština

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (25.04.2017)

Přednáškový kurz (1/3) a cvičení (2/3) jsou zaměřeny na získání znalostí pro práci s buněčnými a tkáňovými kulturami živočichů. Důraz je kladen, jak na odborné znalosti, tak na technické vybavení a bezpečnost. V první části kurzu je probíráno vybavení laboratoře, materiály a jejich vlastnosti, voda, sterilizace, média a suplementy pro živočišné kultury. Druhá část kurzu je zaměřena na založení a udržování kultury včetně disagregace buněk. Dále pak na frakcionaci buněk, pozorování a měření buněk, stanovení proteinů a DNA, histochemické a karyologické techniky. Součástí kurzu je i transfekce buněk, imortalizace kultur a nádorová transformace. Předmět je doporučen pro studenty magisterského a postgraduálního stupně studia. Praktická cvičení jsou turnusová. Kurz je přístupný online na dl2.cuni.cz.

angličtina

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (25.04.2017)

Please note, the lectures are given in czech language only.

Theory and practice of cell and tissue culture. 1/3 of lectures, 2/3 practical class. Materials, sterilization, aseptic technique, media, supplements, disagregation, maintenance of lines, preservation, transformation, cell separation, measurment and quantitation, differentiation, culture of specific cells, gene transfer, karyology.

Literatura

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (25.04.2017)

Freshney, R. Ian: Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. Wiley-Liss 5rd ed., 2005 (ISBN 0-4714-5329-3).

Požadavky ke zkoušce

čeština

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (25.04.2017)

Zápočet: 100% účast na praktických cvičení; zápočet je podmínkou pro složení zkoušky.

Zkouška: ústní, cca 30 min, studentům je umožněna písemná příprava (cca 10 min ).

angličtina

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (07.10.2020)

Credit from practical courses: 100% presence.

Oral exam.

Sylabus

čeština

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (25.04.2017)

Přednáška :

1. Vybavení: sterilní místnost, box, laminární box, termostat, CO2 termostat.

2. Materiály a jejich vlastnosti: sklo, polyethylen, polypropylen, polystyren, PVC, teflon, fenolformaldehyd, guma, silikon, kovy, buničina, papír.

3. Voda: znečištěniny, destilace, reversní osmóza, deionizace, aktivní uhlí, sterilizace.

4. Kontaminace.

5. Aseptická technika.

6. Mytí a úprava povrchu.

7. Sterilizace: suché a vlhké teplo, ozáření, filtrace, plyny a páry, desinfekce povrchů.

8. Základní podmínky života: osmolarita, pH, pufrování, CO2, teplota.

9. Média a suplementy: balancované solné směsi, média, glutamin, antibiotika, bikarbonát, sérum, bezsérová média.

10. Typy kultur: tkáňové, buněčné, kmenové buňky, linie, růst a evoluce kultury.

11. Primární kultury: zdroje tkání, fragmenty a suspense.

12. Udržování kultury: subkultura, výměna média, disagregace buněk, klonování, zamražování.

13. Frakcionace a separace buněk.

14. Pozorování a měření: hemocytometr, cell counter, kalibrace, histochemie, pozorování a měření NK (DAPI, Hoechst), viabilita a cytotoxicita (dye exclusion, tetrazoliové soli). Stanovení proteinů (Lowry, Bradfordová, UV), stanovení DNA (DAPI, EtBr), značení živých buněk.

15. Karyologie: příprava roztěrů, barvení, pruhování chromozómů, hybridizace in situ.

16. Transformace buněk: nádorová transformace, kontaktní inhibice, imortalizace kultur, buněčná fúze, transfekce buněk (positivní a negativní selekce, GFP, lipofekce, elektroporace), COS buňky.

Praktická cvičení :

1. Příprava primární kultury, příprava média.

2. Udržování kultury: pasážování, zamražování, rozmražování.

3. Klonování v agaru.

4. Karyotyp myši.

5. Kultivace a fixace buněk na skle, imunofluorescenční barvení cytoskeletu buněk.

angličtina

Poslední úprava: RNDr. Jana Rubešová, Ph.D. (14.09.2019)

Lectures:

1. Equipment of the laboratory: sterile area, laminar flow, incubators. Materials: glass, plastic, metals.

Water: contamination, distillation, reverse osmosis, deionization, carbon filtration, sterilization.

2. Washing up. Sterilization. Aseptic techniques. Laboratory safety and biohazards. Contamination: mycoplasmas etc. The culture environment: osmolality, pH, buffering, temperature, gas phase.

3. Cell and tissue cultures: animal culture, feeder layer. Media and supplements: balanced salt solution, defined media, serum, serum-free media, selection of medium and serum, other supplements.

4. Disaggregation of the tissue and primary culture: isolation of the tissue, enzymatic disaggregation, collagenase, filtration, centrifugation. Maintenance of the culture: replacement of medium, cell lines, cloning, cell freezing and thawing.

5. Cell counting: hemocytometer, cell counter, calibration. Methods of cell separation: affinity methods, flow cytophotometry. Histochemistry, quantitation of DNA and proteins.

6. Karyology: chromosome preparation, chromosome banding and painting, hybridization.

7. Cell transformation: immortalization, contact inhibition, cell fusion, gene transfer.

Practical class:

1. Primary culture, preparation of medium.

2. Routine maintenance: replacement of medium, cell freezing and thawing.

3. Cell cloning in the presence of a feeder layer.

4. Chromosome preparation and banding.

5. Immunofluorescence.