|
|
||
|
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Praktikum zajišťují: Helena Ryšlavá, Helena Ryšlavá, Veronika Doubnerová, Helena Dračínská, Petr Man, Petr Novák, Petr Pompach, Jiří Liberda Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami používanými při izolaci proteinů a nukleových kyselin. Provádí extrakci proteinů z přírodních materiálů, centrifugaci, vysolování, dialýzu, lyofilizaci... Další metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu. Součástí praktika jsou ústní závěrečné prezentace a diskuse týkající se dosažených výsledků. |
|
||
|
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
http://www.natur.cuni.cz/chemie/biochem/ke-stazeni/biochemicke-praktikum Laboratorní cvičení z biochemie, editoři: Doc. RNDr. M. Kodíček, CSc. a Doc. RNDr. O. Valentová, CSc.; Praha 2000 |
|
||
|
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Podmínky získání zápočtu:
1. provedení všech úloh praktika
2. napsání výstupního testu
3. odevzdání zkontrolovaných a opravených protokolů |
|
||
|
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Studenti vypracují vždy jednu úlohu z následujících okruhů úloh:
1. Izolace proteinu s enzymovou aktivitou a stanovení specifické aktivity
2. Gelová chromatografie
3. Separace proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v prostředí SDS a stanovení relativní molekulové hmotnosti těchto proteinů
4. Sledování afinity enzymu k substrátu - určení Michaelisovy konstanty a maximální rychlosti reakce
5 Určení pH optima, sledování vlivu inhibitorů a aktivátorů na aktivitu enzymu, časový průběh enzymové reakce, detekce enzymové aktivity v polyakrylamidovém gelu
6. Ústní prezentace teorie a výsledků jedné úlohy.
|