Tématem diplomové práce je studium vlivu acetylace postranních řetězců lysinu na funkční vlastnosti HSP90 in vitro. Varianty HSP90 acetylované na definovaných místech budou naklonovány a příslušné rekombinantní proteiny připraveny s využitím techniky expanze genetického kódu expresí v savčích buňkách. Purifikované varianty HSP90 budou použity k funkčním studiím, jako například měření ATPázové aktivity, vazby inhibitorů, schopnosti refoldingu cílových proteinů nebo interakcí s co-chaperony. Budeme rovněž sledovat deacetylaci cílových proteinů zprostředkovanou histondeacetylasou 6, která je hlavní enzymem deacetylujícím HSP90 v buňkách.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
The diploma thesis will investigate the effect of acetylation of lysine side chains on the functional properties of HSP90 in vitro. HSP90 variants, acetylated at permissible positions, will be cloned and the respective recombinant proteins prepared using the genetic code expansion technology in mammalian cells. Purified HSP90 variants will be used for functional studies, such as quantifying ATPase activity, inhibitor binding, refolding of target proteins, and interactions with co-chaperones. We will also monitor the deacetylation of HSP90 mediated by histone deacetylase 6, which is belived to be the major HSP90 deacetylase in cells.
- zadáno a potvrzeno stud. odd.