(2016-2017) Studentka se naučí izolovat buňky z předního laloku hypofýzy, pěstovat primární buněčné kultury, pěstovat, pasážovat a transfekovat buněčné linie HEK293, připravovat elektrody a snímat membránové potenciály a proudy z jednotlivých buněk technikou patch clamp. Začne charakterizovat účinky neurosteroidů na rekombinantní P2X4 receptory v transfekovaných HEK buňkách. (2017-2018) Ve druhém roce se naučí připravovat bodové mutace v DNA P2X4 receptoru, množit DNA a použije připravené mutantní receptory k identifikaci vazebného místa pro vybrané neurosteroidy a jiné alosterické modulátory. Bude studovat účinek neurosteroidů a jiných alosterických modulátorů na elektrofyziologické a sekreční funkce hypofyzárních buněk v primární kultuře, aby získala informace o přesné úloze purinergní signalizace v adenohypofýze. (2018-2019) Bude analyzovat naměřená data a sepisovat disertační práci. Složí rigorozní zkoušku.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
(2016-2017) Student will learn isolation of cells from anterior pituitary gland, maintenance of primary cell culture, culturing and transfection of HEK 293 cell line, preparation of microelectrodes and recording of membrane potentials and currents from single cells using patch clamp technique. She will start with characterization of the effect of neurosteroids on recombinant P2X4 receptors in transfected HEK293 cells. (2017-2018) In the second year of her study, student will prepare single point mutations in the DNA of P2X4 receptor, DNA propagation, and she will use generated mutant receptors to identify binding site for selected neurosteroids and other allosteric modulators in the structure of the P2X4 receptor. She will study the effect of these drugs on electrophysiological and secretory functions of pituitary cells in culture to gain new information about precise physiological role of purinergic signaling in adenohypophysis. (2018-2019). She will analyze obtained data and write PhD Thesis. She will pass final examination.
- zadáno vedoucím/školitelem