Metabolismus fosfolipidů při tvorbě strukturovaných kolonií kvasinek

• Název práce v češtině: Metabolismus fosfolipidů při tvorbě strukturovaných kolonií kvasinek
• Název v anglickém jazyce: Phospholipid metabolism in the formation of structured yeast colonies
• Klíčová slova: strukturované kolonie, INO1, OPI1, Northern analýza a imunodetekce, 2-bromooktanová kyselina
• Klíčová slova anglicky: structured colonies, INO1, OPI1,northern analysis and immunodetection, 2-bromoctanoic acid
• Akademický rok vypsání: 2014/2015
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra genetiky a mikrobiologie (31-140)
• Vedoucí / školitel: RNDr. Michaela Schierová, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 12.11.2014
• Datum zadání: 13.11.2014
• Datum odevzdání elektronické podoby: 28.04.2017
• Datum proběhlé obhajoby: 08.06.2017
• Oponenti: doc. RNDr. Olga Heidingsfeld, CSc.

Předběžná náplň práce

Cíl:Ověřit, zda metabolismus fosfolipidů zasahuje do tvorby biofilmu. Zjistit, zda v přítomnosti selenanu dochází ke změně metabolismu fosfolipidů.
Dílčí úkoly:
Připravit kmeny exprimující fúzní proteiny Ino1p-GFP, Opi1p-GFP, ev. GFP-Opi1p od kmenů PORT a kmenů s delecí genů OPI1 nebo HAC1, které ovlivňují expresi INO1.
Připravit kmen s delecí INO1 a kmen s expresí INO1 řízené promotorem TEF
Srovnat expresi INO1, OPI1 a FLO11 u rodičovských kmenů a připravených kmenů pomocí Northern analýzy
Pomocí fluorescenční mikroskopie, imunodetekce a měření na spektrofluorometru charakterizovat produkci GFP- fúzních proteinů v závislosti na stáří kolonie, zdroji uhlíku a přítomnosti selenu
Charakterizovat morfologii kolonií rodičovského kmene, delečních kmenů ino1, opi1, hac1 a kmene TEF-INO1 -v přítomnosti inhibitoru mastných kyselin (2-bromooktanové kyseliny– včetně optimalizace podmínek)
Sledovat vliv 2-bromooktanové kyseliny na produkci Ino1p-GFP (zejména imunodetekce)