Vliv sulfanu na stárnutí prasečích oocytů in vitro

• Název práce v češtině: Vliv sulfanu na stárnutí prasečích oocytů in vitro
• Název v anglickém jazyce: Effect of hydrogen sulphide on aging of porcine oocytes in vitro
• Klíčová slova: oocyt, prase, stárnutí, sulfan
• Klíčová slova anglicky: oocyte, pig, aging, sulphide
• Akademický rok vypsání: 2007/2008
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra buněčné biologie (31-151)
• Vedoucí / školitel: prof. Ing. Jaroslav Petr, DrSc.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 04.01.2008
• Datum zadání: 25.03.2008
• Datum odevzdání elektronické podoby: 03.09.2010
• Datum proběhlé obhajoby: 24.09.2010
• Oponenti: doc. Ing. Michal Ješeta, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Prasečí oocyty, dozrálé v in vitro podmínkách, které nejsou oplozeny nebo partenogeneticky aktivovány, podléhají procesu, označovanému jako stárnutí. Během stárnutí oocytů dochází ke komplexu strukturních a funkčních změn, které u prasečích oocytů mohou vyústit ve spontánní partenogenetickou aktivaci, fragmentaci či lýzu. V našich kultivačních podmínkách po 3 dnech stárnutí zůstává 23% oocytů ve stádiu metafáze II, 48% je spontánně partenogeneticky aktivováno, 26% oocytů podléhá fragmentaci a 3% oocytů lyzují. Kultivací oocytů v médiu s přídavkem donoru sulfanu Na2S v koncentracích 150 ?M a 300 ?M dochází k úplnému potlačení fragmentace oocytu během stárnutí prasečích oocytů. Inhibicí enzymů katalyzujících v oocytu syntézu sulfanu (cystathionin-?-syntázy a cystathionin-?-lyázy) dochází v průběhu stárnutí k časnějšímu nástupu fragmentace oocytů. Efekt obou inhibitorů lze kompletně zvrátit použitím donoru sulfanu Na2S. Proces stárnutí u prasečích oocytů významně ovlivňuje i úspěšnost aktivačních postupů. U prasečích oocytů, které nebyly vystaveny stárnutí, došlo k partenogenetické aktivaci u 94 % z nich. Po vystavení prasečích oocytů 24 hodinám stárnutí poklesl podíl aktivovaných oocytů na 80%. Vystavení prasečích oocytů 24 hodinám stárnutí v přítomnosti donoru sulfanu vyvolalo další pokles v podílu aktivovaných oocytů (na 68%), avšak takto ošetřené oocyty vykazovaly významně lepší následný časný embryonální vývoj oproti oocytům stárnoucím bez přítomnosti donoru sulfanu. Podíl embryí, která dospěla po 7 dnech kultivace do stádia blastocysty, byl u skupiny oocytů ošetřených během stárnutí donorem sulfanu významně vyšší (16%) než u skupiny oocytů stárnoucích bez vystavení donoru sulfanu (2%).
?

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Unfertilized or parthenogenetically non-activated porcine oocytes matured in vitro conditions are subjected to a process known as aging. During such development, porcine oocytes undergo the complex of the structural and functional changes, which can result in spontaneous parthenogenetic activation, fragmentation or lysis. After three days of culture in our condition, 23% of oocytes remained at the stage of metaphase II, 48% of oocytes were spontaneously parthenogenetically activated, 26% of oocytes were subjected to fragmentation and 3% of oocytes were lysed. The complete suppression of porcine oocyte fragmentation during the process of aging occurred during oocytes cultured in medium with sulphide donor Na2S in concentrations 150 ?M and 300 ?M. Inhibition of enzymes catalyzing the synthesis of hydrogen sulfide in the oocytes during the process of aging (cystathionine-gamma-lyase and cystathionine beta-synthase), iniciates earlier onset of oocytes fragmentation. The effect of both inhibitors could be completely reversed by using sulphide donor Na2S.
The process of aging in porcine oocytes significantly reduces the success of the activation processes. Parthenogenetic activation occurred in 94% of pig oocytes, which were not subjected to aging. The proportion of activated oocytes after exposure to 24 hours of aging decreased to 80%. 24 hours aging exposure of pig oocytes in the presence of hydrogen sulphide donor led to a further decline of the proportion of activated oocytes (68%), however such treatment has showed significantly better subsequent early embryonic development compared to oocytes cultured without the presence of hydrogen sulphide donor. Proportion of embryos that reached after 7 days of culture the blastocyst stage was in the group of oocytes treated during aging by hydrogen sulfide donor significantly higher (16%) than in those without exposure to sulphide donor (2%).