Exprese a purifikace mutantů cytochromu b5 s nepřirozenými aminokyselinami

• Název práce v češtině: Exprese a purifikace mutantů cytochromu b₅ s nepřirozenými aminokyselinami
• Název v anglickém jazyce: Expression and Purification of Cytochrome b₅ Mutants with Non-canonical Amino Acids
• Klíčová slova: nepřirozené aminokyseliny, exprese proteinů, purifikace proteinů, cytochrom b5, hmotnostní spektrometrie
• Klíčová slova anglicky: Non-canonical Amino Acids, Protein Expression, Protein Purification, Cytochrome b5, Mass Spectrometry
• Akademický rok vypsání: 2023/2024
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra biochemie (31-250)
• Vedoucí / školitel: RNDr. Tomáš Ječmen, Ph.D.
• Konzultanti: RNDr. Věra Černá, Ph.D.

Seznam odborné literatury

Jecmen T. et al.: Photo-Methionine, Azidohomoalanine and Homopropargylglycine Are Incorporated into Newly Synthesized Proteins at Different Rates and Differentially Affect the Growth and Protein Expression Levels of Auxotrophic and Prototrophic E. coli in Minimal Medium (Int J Mol Sci, 2023, Jul 22;24(14):11779, doi: 10.3390/ijms241411779)
Jecmen T. et al.: Photo-initiated crosslinking extends mapping of the protein-protein interface to membrane-embedded portions of cytochromes P450 2B4 and b5 (Methods, 2015, Nov 1;89:128-37, doi: 10.1016/j.ymeth.2015.07.015)

Předběžná náplň práce

V práci budou exprimovány vybrané mutantní cytochromy b₅ v auxotrofních bakteriích se zablokovanou drahou syntézy methioninu, které umožňují vnesení nepřirozeného aminokyselinového analogu (foto-methioninu, azidohomoalaninu nebo homopropargylglycinu) do sekvence proteinu. V proteinech bude určeno procento substituce methioninu jeho analogem pomocí hmotnostní spektrometrie a následně budou purifikovány. Čisté preparáty budou využity ke studii interakcí a elektronového přenosu mezi cytochromy b₅ a P450.