Transportní studie in vitro na 2D a 3D buněčné úrovni

• Název práce v češtině: Transportní studie in vitro na 2D a 3D buněčné úrovni
• Název v anglickém jazyce: Transport studies in vitro on 2D and 3D cellular level
• Klíčová slova: buněčné sferoidy, transfekce, HEK293 buňky, nesteroidní antiflogistika, transportní studie
• Klíčová slova anglicky: cell spheroids, transfection, HEK293 cells, nonsteroidal anti-inflammatory drugs, transport studies
• Akademický rok vypsání: 2018/2019
• Typ práce: rigorózní práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra farmakologie a toxikologie (16-16170)
• Vedoucí / školitel: PharmDr. Jana Ramos Mandíková, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno a potvrzeno stud. odd.
• Datum přihlášení: 05.11.2018
• Datum zadání: 05.11.2018
• Datum potvrzení stud. oddělením: 05.11.2018
• Datum a čas obhajoby: 14.02.2019 00:00
• Datum odevzdání elektronické podoby: 13.02.2019
• Datum proběhlé obhajoby: 14.02.2019
• Oponenti: PharmDr. Lucie Smutná, Ph.D.

Zásady pro vypracování

1. Seznámit se problematikou zadané diplomové práce a vyhledat dostupné informace o transportních studiích na 3D buněčných modelech v odborné literatuře.
2. Osvojit si práci ve sterilním prostředí v laboratoři pro buněčné kultivace. Zvládnout kultivaci buněčné linie HEK293.
3. Provést potřebné optimalizace zadaných metod s použitím 2D a 3D modelu.
4. Vyhodnotit získané výsledky, konfrontovat je s teoretickými poznatky a vypracovat písemnou diplomovou práci.

Seznam odborné literatury

Khamdang S, Takeda M, Noshiro R, Narikawa S, Enomoto A, Anzai N, Piyachaturawat P, Endou H. Interactions of human organic anion transporters and human organic cation transporters with nonsteroidal anti-inflammatory drugs. J Pharmacol Exp Ther. 2002;303:534-9.
Mandíková J, Volková M, Pávek P, Česnek M, Janeba Z, Kubíček V, Trejtnar F. Interactions with selected drug renal transporters and transporter-mediated cytotoxicity in antiviral agents from the group of acyclic nucleoside phosphonates. Toxicology. 2013;311:135-46.
Foty R. A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids. J Vis Exp 2011; 51.

Předběžná náplň práce

1. Seznámit se s teoretickou částí zadaného tématu a vyhledat informace o možnostech provedení in vitro transportní studie na 3D úrovni.
2. Připravit se na práci v laboratoři pro buněčné kultivace a poučit se o bezpečnosti. Zvládnout správné laboratorní návyky a kultivaci buněk HEK293 (popř. jiné).
3. Optimalizovat metodu transfekce pro získání optimálního 2D a 3D buněčného modelu k transportním studiím.
4. S vytvořenými modely provést základní transportní studie ze známými substráty a inhibitory. Vybrat vhodné koncentrace testovaných látek, vypočítat ředění, připravit testované látky ve zvolených koncentracích a aplikovat je na připravené buněčné modely.
5. Statisticky vyhodnotit naměřené výsledky, porovnat vytvořené modely mezi sebou, konfrontovat výsledky se současnými teoretickými poznatky a vypracovat písemnou diplomovou práci.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

1. Become familiar with the theoretical part of a given topic and search information about possibilities of performing in vitro transport studies at the 3D level.
2. Prepare for work in the laboratory for cell culture and learn about safety. Manage the good laboratory practice and cultivation of HEK293 cells (or others).
3. Optimize transfection method for obtaining an optimal 2D and 3D cell model for transport studies.
4. Using created cell models perform basic transport studies with known substrates and inhibitors. Select appropriate concentrations of the tested substances, calculate the dilution, prepare the tested compound at selected concentrations and apply them to the prepared cell models.
5. Statistically evaluate the obtained results, compare the created models between them, confront the results with current theoretical knowledge and a write the diploma thesis.