Vliv interferon regulujícího faktoru 3 na imunitní odpověď proti viru vakcínie v atopickém organismu

• Název práce v češtině: Vliv interferon regulujícího faktoru 3 na imunitní odpověď proti viru vakcínie v atopickém organismu
• Název v anglickém jazyce: Effects of the Interferon regulatory factor 3 on immune responses to vaccinia virus in the atopic organism
• Klíčová slova: virus vakcínie, imunitní odpověď, atopie, IRF-3, myš, Balb/c, Nc/Nga
• Klíčová slova anglicky: vaccinia virus, imune responses, atopy, IRF-3, mouse, Balb/c, Nc/Nga
• Akademický rok vypsání: 2016/2017
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra buněčné biologie (31-151)
• Vedoucí / školitel: MUDr. Zora Mělková, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 23.11.2016
• Datum zadání: 23.11.2016
• Datum odevzdání elektronické podoby: 03.01.2019
• Datum proběhlé obhajoby: 24.01.2019
• Oponenti: RNDr. Karel Drbal, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Virus vakcínie (VACV) indukuje velmi dobrou imunitní odpověď navzdory tomu, ze kóduje mnoho faktorů, které modulují či interferují s imunitní odpovědí hostitele. Mimo jiné VACV specificky inhibuje fosforylaci Interferon regulujícího faktoru-3 (IRF-3) a expresi interferonu typu I na mnoha úrovních. Abychom obešli tento blok, vytvořili jsme rekombinantní VACV exprimující myší IRF-3 (WR-IRF3).
Diplomová práce bude spočívat ve stanovení efektů WR-IRF3 a kontrolního WR-Luc exprimujícího luciferasu ma imunitní odpověď normálních myší Balb/c a spontánně atopických myší Nc/Nga. Pomocí jednokrokového RT-qPCR budou stanoveny hladiny mRNA pro interferony typu I a II a dalších cytokinů v kůži, MALT (mucosa-associated lymphoid tissue) a slezinách po inokulaci jednotlivých rekombinantních virů. Dále bude stanovena sérová hladina cytokinů typických pro imunitní odpověď Th1, 2 a 17 pomocí ELISA. Konečně bude charakterizována indukce protektivní imunity proti letální infekci divokým typem VACV kmene WR jako modelu infekce virem černých neštovic. Šíření VACV v těle bude charakterizováno titrem viru a VACV DNA pomocí qPCR. Translokace a fosforylace IRF-3 exprimovaného rekombinantním virem WR-IRF3 bude ověřena in vitro na myší fibroblastové linii.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Vaccinia virus (VACV) induces very good immune responses despite the fact that it encodes many factors that modulate or interfere with host immune responses. Among others, VACV specifically inhibits phosphorylation of Interferon Regulatory Factor-3 (IRF-3) and expression of type I interferons at multiple levels. To overcome this block, we have generated a recombinant VACV expressing murine IRF-3 (WR-IRF3).
The diploma thesis will consist in the assessment of effects of WR-IRF3 and control WR-Luc expressing luciferase on immune responses of normal Balb/c and spontaneously atopic Nc/Nga mice. To this end, mRNA levels of interferons type I, II as well as other specific cytokines will be determined using 1-step RT-qPCR in skin, mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) and spleens after inoculation of individual recombinant viruses. Further, Th1, 2, and 17 signature cytokines will be determined in serum of infected mice by ELISA. Finally, induction of protective immunity against lethal infection with wild type VACV strain WR, a surrogate of smallpox will be characterized. The spread of VACV throughout the body will be determined by virus titres and qPCR of VACV DNA. Translocation and phosphorylation of IRF-3 expressed by WR-IRF3 will be verified in vitro in mouse fibroblast cell lines.