LGR4 (leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4) patří spolu s LGR5 a LGR6 do B podskupiny LGR receptorů. Poměrně nedávno byly identifikovány ligandy pro tuto skupinu receptorů, tzv. R-spondiny, jež jsou modulátory Wnt kanonické signalizace. Tato signalizace je klíčová pro udržení homeostáze ve střevě a její deregulace je spojená se vznikem novotvarů. Zajímavé je, že jak u člověka, tak i u myši byla zaznamenána vysoká míra exprese Lgr4 na úrovni RNA právě v tenkém a tlustém střevě. Cílem diplomové práce je charakterizace Lgr4 v myším střevě a to jak z hlediska morfologického, tak i z hlediska funkčního. Lgr5, jeden z paralogů Lgr4, byl v nedávné době identifikován jako marker střevních kmenových buněk. Aktuálně publikované studie ukazují zvýšený výskyt LGR4 u rozdílných typů buněk v rámci střevní krypty. Jedná se o kmenové buňky, Panethovy buňky a tranzitní dělící se buňky. Náplní práce bude identifikovat expresi Lgr4 pomocí imunohistochemie a western blotu. Mimo to bude na základě pozitivity Lgr4 a Lgr5 genů sledována exprese u markerů charakterizujících různé buněčné typy v rámci střevní krypty. Vzhledem k nejasnému postavení LGR4 v rozvoji kolorektálního karcinomu bude role LGR4 sledována u myších modelů specifických pro toto onemocnění. Pro výše zmíněné analýzy budou využity jak myší kmeny v nedávné době generované v naší laboratoři (kmen nesoucí endogenně označený Lgr4 a kmen pro Lgr4 knockout), tak i myší kmeny již dříve zakoupené (kmen nesoucí zkrácenou formu genu pro APC a kmen nesoucí GFP knockin do lokusu genu Lgr5).
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
LGR4 (leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4) belongs together with LGR5 and LGR6 to B subgroup of LGR receptors. R-spondins, recently identified ligands for B class of LGR receptors modulate Wnt catenin signalling. The Wnt catenin signalling plays the key role in intestine homeostasis and its deregulation is connected with neoplasia. Interestingly, both in human and mouse, high expression of Lgr4 on RNA level was noticed in colon and small intestine. The subject of the Master thesis is morphological and functional characterization of Lgr4 in the mouse intestine. Lgr5, one of the Lgr4 paralogs, was recently identified as the marker of intestinal stem cells. Currently published studies suggest the Lgr4 expression in several different cell types inside of the intestinal crypt including stem cells, Paneth cell and transit amplifying cells. The goal of the work is to identify the Lgr4 expression by immunohistochemistry and western blot. Subsequently based on Lgr4 and Lgr5 positivity, expression markers of different cell types of the intestinal crypt will be screened. In the aspect of unclear position of Lgr4 in colorectal carcinoma, the Lgr4 will be studied also in mouse models specific for the disease. Above mentioned analysis will apply mouse strains
- zadáno vedoucím/školitelem