Nová skupina aktivačních receptorů z imunoglobulinové rodiny, označovaných jako "receptory přirozené cytotoxicity" (z angl. natural cytotoxicity receptors, NCR) zahrnující proteiny NKp30, NKp44 a NKp46, byla objevena pro svou roli v aktivaci a cytotoxické odpovědi "přirozených zabíječských" buněk (z angl. natural killer, NK). Pro receptor NKp30 byla v nedávné době objevena pestrá paleta ligandů. Bylo ukázáno, že NKp30 specificky rozeznává pp65 protein z tegumentu lidského cytomegaloviru, a dále jaderný faktor BAT3, který je nezbytný pro acetylaci proteinu p53, což je klíčová událost během buněčné odpovědi na poškození DNA. Avšak blokování receptoru NKp30 proteinem pp65 neovlivnilo vazbu faktoru BAT3 na NKp30-Ig vázaný na destičce, což naznačuje, že proteiny BAT3 a pp65 rozeznávají odlišné, nepřekrývající se, epitopy na NKp30. Virový protein pp65 nemá žádnou strukturní homologii k faktoru BAT3, ale podobně jako on je lokalizován v jádru infikovaných buněk, odkud je uvolněn během lýze infikované buňky NK buňkou či ve formě exozomů během procesu známého jako "poškozením indukované rozpoznávání". Velmi nedávno byl objeven třetí ligand pro NKp30 receptor - protein označovaný B7-H6 vyskytující se na povrchu nádorových buněk a struktura tohoto komplexu již byla vyřešena. Později však bylo ukázáno, že glykosylace hraje podstatnou roli ve vazbě na tyto ligandy a vzhledem k tomu, že použité proteiny byly exprimovány v bakteriálních expresních systémech, nemohla být glykosylace ve struktuře komplexu pozorována. Cílem této práce je připravit glykosylovaný receptor NKp30 v HEK293 expresním systému a sledovat tvorbu jeho komplexu s ligandem B7-H6 připraveným obdobným způsobem, případně se pokusit vyřešit strukturu glykosylovaného komplexu pomocí proteinové krystalografie či dalšími metodami strukturní biologie.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
A group of novel activating receptors belonging to the immunoglobulin family and designated natural cytotoxicity receptors (NCR) that involves proteins NKp30, NKp44, and NKp46 has been discovered to play role in activation and cytotoxic response of natural killer (NK) cells. In the case of NKp30, an interesting mosaic of target ligands have emerged recently. It has been shown that NKp30 specifically recognizes the pp65 protein from human cytomegalovirus tegument and also a nuclear factor BAT3 that is crucial for p53 protein acetylation, a central event for the cellular DNA damage response. However, blocking of NKp30 by pp65 did not interfere with BAT3 binding to plate-bound NKp30-Ig, suggesting that BAT3 and pp65 bind to different, not overlapping, NKp30 epitopes. The viral factor pp65 has no structural homology to BAT3, but similarly as BAT3 is localized in the cell nuclei of infected cells from where it is released during the lysis of an infected cell by an NK cell or in the form of exosomes, respectively, in a process of so-called “damage-induced recognition”. Quite recently, a third ligand for NKp30 was found to be a tumor-induced molecule designated B7-H6 and the structure of this complex has been solved. Later it was also shown that NKp30 glycosylation plays a crucial role in binding to these ligands but since the proteins used for structural studies were expressed in bacteria, the glycosylation could not be observed in the structure. Aim of the thesis is to prepare glycosylated NKp30 receptor in HEK293 expression system and measure its complex formation with B7-H6 ligand prepared in similar way, alternatively to try to solve the structure of glycosylated complex by protein crystallography or other techniques of structural biology.
- zadáno vedoucím/školitelem