Nová skupina aktivačních receptorů z imunoglobulinové rodiny, označovaných jako "receptory přirozené cytotoxicity" (z angl. natural cytotoxicity receptors, NCR) zahrnující proteiny NKp30, NKp44 a NKp46, byla objevena pro svou roli v aktivaci a cytotoxické odpovědi "přirozených zabíječských" buněk (z angl. natural killer, NK). Pro receptor NKp30 byla v nedávné době objevena pestrá paleta ligandů. Bylo ukázáno, že NKp30 specificky rozeznává pp65 protein z tegumentu lidského cytomegaloviru, a dále jaderný faktor BAT3, který je nezbytný pro acetylaci proteinu p53, což je klíčová událost během buněčné odpovědi na poškození DNA. Avšak blokování receptoru NKp30 proteinem pp65 neovlivnilo vazbu faktoru BAT3 na NKp30-Ig vázaný na destičce, což naznačuje, že proteiny BAT3 a pp65 rozeznávají odlišné, nepřekrývající se, epitopy na NKp30. Virový protein pp65 nemá žádnou strukturní homologii k faktoru BAT3, ale podobně jako on je lokalizován v jádru infikovaných buněk, odkud je uvolněn během lýze infikované buňky NK buňkou či ve formě exozomů během procesu známého jako "poškozením indukované rozpoznávání". Velmi nedávno byl objeven třetí ligand pro NKp30 receptor - protein označovaný B7-H6 vyskytující se na povrchu nádorových buněk a struktura tohoto komplexu již byla vyřešena. Cílem této práce je navrhnout a připravit expresní konstrukty a vektory pro proteiny BAT3 a pp65, exprimovat je buď v E. coli či v HEK293 expresním systému a ověřit tvorbu jejich komplexu s NKp30 receptorem.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
A group of novel activating receptors belonging to the immunoglobulin family and designated natural cytotoxicity receptors (NCR) that involves proteins NKp30, NKp44, and NKp46 has been discovered to play role in activation and cytotoxic response of natural killer (NK) cells. In the case of NKp30, an interesting mosaic of target ligands have emerged recently. It has been shown that NKp30 specifically recognizes the pp65 protein from human cytomegalovirus tegument and also a nuclear factor BAT3 that is crucial for p53 protein acetylation, a central event for the cellular DNA damage response. However, blocking of NKp30 by pp65 did not interfere with BAT3 binding to plate-bound NKp30-Ig, suggesting that BAT3 and pp65 bind to different, not overlapping, NKp30 epitopes. The viral factor pp65 has no structural homology to BAT3, but similarly as BAT3 is localized in the cell nuclei of infected cells from where it is released during the lysis of an infected cell by an NK cell or in the form of exosomes, respectively, in a process of so-called “damage-induced recognition”. Quite recently, a third ligand for NKp30 was found to be a tumor-induced molecule designated B7-H6 and the structure of this complex has been solved. Aim of the thesis is to design and prepare expression constructs and vectors for BAT3 and pp65 proteins, express them in either E. coli or HEK293 expression system and to verify the complex formation with the NKp30 receptor.
- zadáno vedoucím/školitelem