Porovnání kvality a fenotypu DC při kultivaci v různých GMP médiích

• Název práce v češtině: Porovnání kvality a fenotypu DC při kultivaci v různých GMP médiích
• Název v anglickém jazyce: Evaluation of maturation Status and functional ability of dendritic cells; cultivated in various GMP culture media
• Klíčová slova: dendritické buňky, imunoterapie, kultivační médium
• Klíčová slova anglicky: dendritic cells, imunotherapy, laboratory prepared medium
• Akademický rok vypsání: 2010/2011
• Typ práce: bakalářská práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Ústav lékařské chemie a klinické biochemie (13-352)
• Vedoucí / školitel: Mgr. Hana Hromádková
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 04.01.2011
• Datum zadání: 04.01.2011
• Datum a čas obhajoby: 31.05.2011 10:30
• Datum odevzdání elektronické podoby: 08.05.2011
• Datum odevzdání tištěné podoby: 08.05.2011
• Datum proběhlé obhajoby: 31.05.2011
• Oponenti: RNDr. Anna Fialová, Ph.D.

Seznam odborné literatury

1. Hořejší Václav, Bartůňková Jiřina. Základy imunologie. Praha: TRITON, 4. vydání 2009, ISBN 978-80-7387-280-9

2. Bartůňková Jiřina, et al. Vyšetřovací metody v imunologii. Praha: Grada Publishing, a.s., 2005, ISBN 80-247-0691-1

3. Krejsek Jan, Kopecký Otakar. Klinická imunologie. Hradec Králové: Nucleus HK, 2004, ISBN 80-86225-50-X

4. Steinman RM, Cohn ZA. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J Exp Med. 1973 May 1; 137(5): 1142-62

5. Caux C. CD34+ hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to GM-CSF+TNF alpha. J Exp Med. 1996, 184, s. 695-706

6. Dzionek A. et al. Plasmacytoid dendritic cells from specific surface markers to specific functions. Hum Immunol. 2002 Dec. 63 (12): 1133-48

7. Colonna M., Trinchieri G., Liu Y-J. Plasmacytoid dendritic cells in immunity. Nature Immunology, 2004, 5, s. 1219-1226

8. Bartůňková J., Špíšek R. Dendritická buňka v imunitě. Vesmír 82, 212, 2003/4 – ISSN 1214-4029

9. Šedivá D., Stříž I. Dendritické buňky a jejich úloha v imunitních reakcích. Alergie [online].2002 [cit.2010-12-06]. Dostupný z WWW:
http://www.tigis.cz/alergie/alergie202/sediva.htm
10. Kaisho T., Shizuo A. Toll-like receptor function and signaling. J. Allergy Clin. Immunol., 2006, 117: 980-989

11. Kočárek E.,Molekulární biologie v medicíně. Brno: Národní centrum ošetřovatelství a nelékařských zdravotnických oborů, 2007, ISBN: 978-80-7013-450-4

12. Bartůňková J., Špíšek R., Dendritická buňka v protinádorové terapii, Vesmír 82, 254, 2003/5, ISSN: 1214-4029

13. Rožková D., et al., Focus on Focis: Combined chemo-immunotherapy for the treatment of hormone-refractory metastatic prostate cancer. Clin Immunol 2009, 131, s. 1-10

14. SÚKL, VYR-32 dopl.1 verze 1,Výroba sterilních léčivých přípravků. Platnost od 1.3.2009, [cit.2011-03-18]. Dostupný z WWW: http://www.sukl.cz/leciva/vyr-32-dopl-1-verze-1

15. Fučíková J.,Rigorózní práce: Příprava protinádorové vakcínypro imunoterapii karcinomu ovária za podmínek správné výrobní praxe, 2009, Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové

Předběžná náplň práce

Dendritické buňky jsou antigen prezentující buňky s velkým potenciálem k využití v imunoterapeutické léčbě nádorů. Principem protinádorové imunoterapie je indukce imunitní odpovědi proti nádorovým buňkám. Z monocytů získaných z periferní krve pacienta je možné připravit dendritické buňky v in vitro podmínkách.
Ve své práci jsem se zaměřila na podmínky kultivace dendritických buněk z monocytů periferní krve zdravých dárců. Pro účely výroby imunoterapeutické vakcíny je nezbytné řidit se pravidly správné výrobní praxe (GMP). Je možné používat chemikálie pouze v GMP kvalitě.. Mezi testovaná média jsme zařadili médium CellGro od firmy CellGenix a médium DendriMASC od firmy Myltenyi. Obě komerční média jsme také porovnávali s médiem připravovaným v laboratoři RPMI obsahujicím 10 % AB sérum,. Cytokiny IL-4 a GM-CSF jsme měli k dispozici od tří firem CellGenix, Myltenyi a Gentaur.
Z výsledků našich pokusů vyplývá, že jako nejvhodnější médium pro kultivaci dendritických buněk za podmínek správné výrobní praxe je CellGro. Rozdíl mezi jednotlivými cytokiny se nám nepodařil prokázat.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Imunotherapy is a new approach for treatment of cancer. Dendritic cells, professional antigen presenting cells, are very promising subset of cells, that can be used in cancer imunotherapy. DCs can be generated in vitro from monocytes.
We focused on definining the optimal conditions for the generation DCs from monocytes from healthy donors. It is necessary to use all chemicals in good manufacturing practice (GMP) quality during the manufacturing process. We used commercial culturing media CellGro (CellGenix) and DendriMACS (Miltenyi) and we compared those with laboratory prepared medium RPMI with 10% AB serum. We used cytokines IL-4 and GM-CSF from three manufacturers – CellGenix, Miltenyi and Gentaur.
We found that CellGro is the best medium for our purposes –culturing DCs under GMP conditions. On the other hand there is no difference between three distinct producers of cytokines.