Sekvenování lokusů Acc-1 a Acc-2 (kódujících plastidovou a cytoplazmatickou formu enzymu acetyl-CoA karboxylasy) z pšenic Triticum urartu, Aegilops tauschii, Triticum turgidum, a Triticum aestivum: Budou isolovány BAC vektory obsahující na základě publikovaných informací Acc geny. Přítomnost Acc v nich bude potvrzena PCR amplifikací a sekvenováním fragmentu s Acc genem. BAC DNA bude naštěpena a vyčištěné DNA fragmenty budou klonovány do vektoru pSMART a sekvenovány. Z výsledků ?získaných z jednotlivých sekvenací bude poskládána celá sekvence lokusů Acc-1 a Acc-2. Sekvence Acc-1 a Acc-2 lokusů pšenice bude analyzována z hlediska evoluce těchto genů a původu tří genomů v moderní hexaploiní pšenici.Pět aminokyselinových substitucí (Ile-1,781- Leu, Trp-1,999-Cys, Trp-2,027-Cys, Ile-2,041-Asn, and Asp-2,078-Gly, číslované podle plasidové Acc z Alopecurus myosuroides) v plastidové Acc v populaci ovsa hluchého bylo označeno jako zodpovědné za resistenci k aryloxyfenoxypropionátovým a cyclohexanedionovým herbicidům. Pokusíme se s pomocí kvasinkového gene-replacement systému zjistit zda tyto jednotlivé jednomístné mutace způsobí resistenci k herbicidům i u pšeničné plastidové Acc. Kvasinkový gene-replacement systém použijeme také pří hledání nových inhibitorů lidské Acc. Acc se účastní regulace oxidace mastných kyselin a? regulace stravovacích návyků? zvířat a tak se nabízí jako důležitý cíl pro nové léky k léčbě lidských nemocí.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Sequencing of Acc-1 and Acc-2 loci (encoding the plastid and cytosolic forms of the enzyme acetyl-CoA carboxylase) from each of the wheats Triticum urartu,Aegilops tauschii,Triticum turgidum, andTriticum aestivum:BACs containing Acc genes predicted on the basis of previously published sequence information will be isolated. The identity of all isolated BACs will be confirmed by PCR amplification and sequencing of a fragment of the Acc genes. BAC DNA will be sheared and gel-purified DNA fragments will be cloned into vector pSMART and sequenced . Se- quence contigs will be assembled and edited. The DNA sequences of wheat Acc-1 and Acc-2 loci, will be analyzed with a view to understanding the evolution of these genes and the origin of the three genomes in modern hexaploid wheat.
Five amino acid substitutions (Ile-1,781- Leu, Trp-1,999-Cys, Trp-2,027-Cys, Ile-2,041-Asn, and Asp-2,078-Gly, numbered according to the Alopecurus myosuroides plastid Acc) in plastid Acc in wild oat populations are suspected of harboring Acc-related resistance to aryloxyphenoxypropionate (APP) and cyclohexanedione herbicides. Using a yeast gene-replacement system, we will try to test whether these single-site mutations also confer herbicide resistance to wheat plastid Acc.We will use the yeast gene-replacement system also to search for new inhibitors of human Acc. Acc regulates fatty acid oxidation and feeding behavior in animals so it provides an important target for new drugs to treat human diseases.
- zadáno a potvrzeno stud. odd.