Studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk Xenopus tropicalis in vitro.

• Název práce v češtině: Studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk Xenopus tropicalis in vitro.
• Název v anglickém jazyce: In vitro study of differential potential of Xenopus tropicalis Sertoli stem cells.
• Klíčová slova: Xenopus, kmenové buňky, diferenciace.
• Klíčová slova anglicky: Xenopus, stem cells, differentiation.
• Akademický rok vypsání: 2024/2025
• Typ práce: rigorózní práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra buněčné biologie (31-151)
• Řešitel: skrytý - zadáno a potvrzeno stud. odd.
• Datum přihlášení: 14.10.2015
• Datum zadání: 14.10.2015
• Datum potvrzení stud. oddělením: 25.03.2025
• Datum odevzdání elektronické podoby: 16.09.2024
• Datum proběhlé obhajoby: 01.04.2025

Předběžná náplň práce

Cílem disertační práce je studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk (XTSSC) a Sertoliho kmenových buněk exprimujících RFP (XTSSC-RFP) žáby druhu X. tropicalis pomocí diferenciačních faktorů neuroektodermu, mesodermu a entodermu. Embryoidní tělíska XTSSC a XTSSC-RFP budou připravována kultivační metodou zavěšené kapky. Poté budou embryoidní tělíska kultivována v médiu obsahující vybrané růstové faktory: insulin, transferin, selen pro neuroektoderm; aktivin A, kyselina retinová, bazický FGF pro mesoderm a mix růstových gaktorů N2 a B27 společně s přídavkem nikotinamidu a bFGF pro entoderm. Stav diferenciace u takto kultivovaných XTSSC a XTSSC-RFP bude potvrzován pomocí qPCR a imunocytohistochemického barvení využívající specifické markery pro jednotlivé zárodečné listy a jejich deriváty (Msi1, nestin, Gata4, Kdr, atd.). Pro konečné potvrzení stavu diferenciace takto připravených buněk X. tropicalis bude provedena jejich transplantace do blastocoelu či perotoneální dutiny pulců stejného druhu.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The purpose of this project is to study in vitro X. tropicalis Sertoli stem cell (XTSSC) and RFP positive X. tropicalis Sertoli stem cell (XTSSC-RFP) differentiation potential range using neuroectoderm, mesoderm and entoderm differentiation factors. Hanging drop techniques will be employed to form embryoid bodies derived from XTSSC and XTSSC-RFP. After that embryoid bodies will be cultivated in the medium enriched with selected growth factors: neuroectoderm - insulin, transferrin, selenium chloride, mesoderm – activing A, retinoic acid, bFGF, entoderm - N2, B27 a bFGF, nicotinamide. Differentiation status will be evaluated using qPCR and immunohistochemistry analysis utilizing ectodermal specific marker Msi1, neuroectodermal markers - Nestin (Nes), Synaptophysin (Syp) and Dopamine receptor D2 (Drd2), endodermal markers - Gata4 or von Willebrand factor -Vwf and mesodermal marker Kdr (kinase insert domain receptor). Finally XTSSC and XTSSC-RFP differentiation potential range will be confirmed via allogeneic microinjections of embryoid bodies before and after in vitro differentiation into blastocoel or tadpole´s peritoneal cavity.