CRISPR/Cas9 editing of leukemic B-cells: searching for the miR-155 targets involved in the leukemogenesis.
| Název práce v češtině: | Editace leukemických B-buněk pomocí CRISPR/Cas9: hledání cílů miR-155 účastnících se procesu leukemogeneze |
|---|---|
| Název v anglickém jazyce: | CRISPR/Cas9 editing of leukemic B-cells: searching for the miR-155 targets involved in the leukemogenesis. |
| Klíčová slova: | genová editace, B-buňky, qRT-PCR, mikroRNA, leukémie |
| Klíčová slova anglicky: | gene therapy, B-cells, qRT-PCR, microRNA, leukemia |
| Akademický rok vypsání: | 2023/2024 |
| Typ práce: | diplomová práce |
| Jazyk práce: | angličtina |
| Ústav: | Katedra genetiky a mikrobiologie (31-140) |
| Vedoucí / školitel: | RNDr. Karina Savvulidi Vargová, Ph.D. |
| Řešitel: |
| Předběžná náplň práce |
| Chronická lymfocytární leukemie (CLL) je onemocnění B-lymfocytů, které vlivem mutací/delecí ztratily svoji původní funkci a dochází k jejich nadměrné akumulaci v periferní krvi, kostní dřeni a lymfatických uzlinách. CLL představuje nemoc populace vyššího věku (v průměru 70 let), a zároveň jednu z nejčastějších leukémií, která je stále zcela nevyléčitelná. Exprese genů (transkripce) v buňce je velmi precizně regulována malými nekódujícími mikroRNA (miRNA) a to přes komplementaritu cílových mRNA. Jedná se převážně o inhibici exprese genů. Mezi signifikantně změněné miRNA u CLL patří také miR-155 (hsa-miR-155-5p, MIR155HG), onkogénní miRNA, která ovlivňuje v buňce téměř všechny procesy a dráhy. Exprese miR-155 je přímo úměrná progresi CLL, je tedy spolehlivým márkrem vývoje nemoci. Pro pochopení role miR-155 u CLL jsme úspěšně vytvořili miR-155-/- CLL linie pomocí CRISPR/Cas9 technologie. Jedním z často mutovaných genů u CLL (u 80 % pacientů s del(11q)) je gen BIRC3, který je také spojován se špatnou prognózou nemoci. BIRC3 plní funkci aktivátoru signální dráhy NFĸB. Proto je naším cílem vytvořit (pozměnit pomocí genové editace CRIPSPR/Cas9) CLL linie s delecí BIRC3 samostatně a také spolu s miR-155 -/-, získat tzv. dvojitého mutanta: BIRC3 -/- miR-155 -/-. Pomocí kvantitativní PCR budeme sledovat změny v genové expresi cílů miR-155 a dalších důležitých genů (buněčný cyklus, proliferace, apoptóza a jiné). Dále pomocí příslušných esejí budeme sledovat proliferaci, viabilitu, apoptózu a buňkový cyklus CLL linií. Objasnění funkce a vlivu BIRC3 a miR-155 na experimentálním CLL modelu (CLL linie) pomůže k lepší diagnostice a terapii CLL pacientů. |