In vitro study of 99mTc-labelled peptide targeted on VEGF receptor

• Název práce v češtině: In vitro studium 99mTc-značeného peptidu cíleného na VEGF receptor
• Název v anglickém jazyce: In vitro study of 99mTc-labelled peptide targeted on VEGF receptor
• Klíčová slova: angiogeneze, peptid, technecium-99m, SPECT, VEGFR
• Klíčová slova anglicky: angiogenesis, peptide, technetium-99m, SPECT, VEGFR
• Akademický rok vypsání: 2022/2023
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: angličtina
• Ústav: Katedra biofyziky a fyzikální chemie (16-16110)
• Vedoucí / školitel: doc. Mgr. Pavel Bárta, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 03.03.2023
• Datum zadání: 03.03.2023
• Datum a čas obhajoby: 17.09.2024 09:00
• Datum odevzdání elektronické podoby: 26.08.2024
• Datum proběhlé obhajoby: 17.09.2024
• Oponenti: PharmDr. Zbyněk Nový, Ph.D.

Zásady pro vypracování

1. The research of information about the topic in published scientific literature and articles.
2. To get practise with the cell culturing, radionuclides, radiolabelled ligands and instruments for radioacitve radiation measurement.
3. The evaluation of obtained results and their confrontation with theoretical findings.
4. The discussion of theoretical knowledge and own experimental results in a diploma thesis.

Seznam odborné literatury

1. Björke H, Andersson K. Measuring the affinity of a radioligand with its receptor using a rotating cell dish with in situ reference area. Appl Radiat Isot. 2006 Jan;64(1):32-7.
2. Bigott-Hennkens HM, Dannoon S, Lewis MR, Jurisson SS. In vitro receptor binding assays: general methods and considerations. Q J Nucl Med Mol Imaging. 2008 Sep;52(3):245-53.
3. Paweł Kręcisz et al., Radiolabeled Peptides and Antibodies in Medicine. Bioconjugate Chem. 2021, 32, 1, 25–42.
4. Nikolaus Krall et al. A 99mTc-Labeled Ligand of Carbonic Anhydrase IX Selectively Targets Renal Cell Carcinoma In Vivo. J Nucl Med. 2016 Jun;57(6):943-9.
5. Lucia de Rosa et al. Switching the N-Capping Region from all-L to all-D Amino Acids in a VEGF Mimetic Helical Peptide. Molecules 2022, 27(20), 6982.

Předběžná náplň práce

Student se seznámí se současnými poznatky v oblasti problematiky nádorových onemocnění se zaměřením na angiogenezi a v oblasti kinetiky receptorových interakcí v in vitro prostředí prostřednictvím odborné literatury a informačních databází. Dále si osvojí práci s buněčnými kulturami s následným využitím pro buněčné experimenty. V oblasti in vitro experimentů se zaměří na interakci receptor-radiofarmakum a s tím spojené stanovení kinetického parametru jako je disociační konstanta. Cílovým receptorem na nádorové buněčné linii bude receptor VEGFR. Student bude pracovat v prostředí radionuklidové laboratoře, proto si osvojí bezpečnost práce s radioaktivními zářiči. V rámci experimentů se bude provádět radioaktivní značení peptidu vybraným radionuklidem technetium-99m. Připravené radiofarmakum bude testováno na čistotu a stabilitu pomocí ITLC a HPLC metod. Experimenty s radioaktivně značeným peptidem na buněčné kultuře budou provedeny pomocí klasické manuální techniky a současně pomocí přístroje LigandTracer Yellow, umožňující automatickou radioimunoanalýzu v reálném čase. Naměřené hodnoty prostřednictvím manuální techniky se budou vyhodnocovat pomocí programů jako MS Excel a GraphPad Prism a pro automatickou radioimunoanalýzu prostřednictvím programu TraceDrawer. Veškeré teoretické a praktické poznatky stejně tak jako výsledky a jejich diskuse budou shrnuty v diplomové práci.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The master student will search for the current knowledge in the area of cancer diseases particularly aimed at the angiogenenic process and also in the field of receptor interaction kinetics in in vitro environments with the help of scientific literature. The master students´s experimental work will be focused on the cell culturing with the subsequent use in cell experiments. The main target of in vitro experiments will be radiopharmaceutical – receptor interaction followed with dissociation constant assessment. VEGF receptors will be used as the targeted for radiolabelled peptide in experiments. The master student will work at radionuclide laboratory with the appropriate safety rules. The master student will perform the radiolabelling of peptide with technetium-99m. The prepared radiolabelled peptide will be tested on its purity and stability with the employment of iTLC and HPLC techniques. The experiments with a cell line will be performed by either the manual technique or automated radioimmunoassay represented by LigandTracer technology. The obtained results from the manual technique or radioimmunoassay will be analysed in MS Office Excel and GraphPad Prism or by TraceDrawer, respectively. The final task for the master student is to summarize the theoretical, practical and measured data in a thesis.