Protein tepelného šoku 71 kDa (Hsc70) je zástupcem rodiny proteinů tepelného šoku 70 a je kódován genem HSPA8 v lidském genomu. HSC70 plní několik důležitých úkolů v buňkách, včetně správného skládání nově translatovaných a chybně složených proteinů, stejně jako stabilizuje nebo degraduje mutantní proteiny; účastní se také dalších biologických procesů včetně signální transdukce, apoptózy, autofagie, proteinové homeostázy, buněčného růstu a diferenciace. Regulace buněčného poolu HS70 je tedy nesmírně důležitá; jedna ze současných hypotéz popisuje inaktivaci HSC70 prostřednictvím oligomerizace, která již byla prokázána analytickou gelovou filtrací. Tato práce se zabývá zkoumáním oligomerizačních vlastností HSC70 WT a jeho mutantů pomocí chemického síťování a hmotnostní spektrometrie včetně stabilního izotopového značení rekombinantních proteinů pomocí 15N. Poslední technika vyžaduje produkci 15N-verzí každého studovaného proteinu. Student se v rámci projektu bude věnovat přípravě proteinů HSC70 a jeho mutantních verzí (L392E, L394E a V438F) pomocí rekombinatní technologei exprese v E. coli, renaturaci připravených proteinů, určení homogenity a čistoty připravených proteinů pomocí SDS elektroforesy, gelové filtraie a hmotnostní spektrometrii, sledování oligomerizace připravených proteinů metodami chemického zesítění nebo kovalentního značení.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Preparation of HSC70 proteins and its mutant versions (L392E, L394E a V438F) utilizing recombinant expression technology in E. coli, renaturation of prepared proteins, determination of homogeneity and purity of prepared proteins using SDS electrophoresis, gel filtration and mass spectrometry, oligomerization monitoring of prepared proteins by chemical cross-linking or covalent labeling methods.
- zadáno a potvrzeno stud. odd.