Náplní práce bude rekombinantní exprese mutované formy sortasy A v bakteriálním expresním systému, její purifikace a charakterizace, a následně optimalizace její transpeptidasové reakce s pomocí fluorescenčně značeného peptidového substrátu a proteinu s odpovídající komplementární peptidovou kotvou. Tím bude protein MICA, nádorový marker a ligand pro aktivační receptor lidských NK buněk NKG2D. Dalším cílem práce tedy bude klonování a příprava upravené rozpustné formy MICA obsahující sekvenci aminokyselin LPETG pro reakci katalyzovanou sortasou.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
The thesis aims at the recombinant expression of the mutant form of sortase A in bacterial expression system, its purification, characterization, and subsequent optimization of its transpeptidase reaction using a fluorescently labeled peptide substrate and a protein with the corresponding complementary peptide tag. This protein will be the tumor marker MICA, a ligand for the activation receptor of human NK cells NKG2D. The next aim of the thesis thus will be the cloning and production of a soluble form of MICA bearing LPETG amino acid sequence for the sortase-catalyzed reaction.
- zadáno vedoucím/školitelem