Studium maternálně-fetálního mikrochimérismu APC s využitím MHCII/EGFP myšího modelu a clearovacích histologických technik

• Název práce v češtině: Studium maternálně-fetálního mikrochimérismu APC s využitím MHCII/EGFP myšího modelu a clearovacích histologických technik
• Název v anglickém jazyce: Study of the materno-fetal microchimerism of the APC using MHCII/EGFP mouse model and clearing histological techniques
• Klíčová slova: mikrochimérismus, clearingové histologické metody, antigen-prezentující buňky, light-sheet mikroskopie
• Klíčová slova anglicky: microchimerism, clearing histological techniques, antigen-presenting cells, light-sheet microscopy
• Akademický rok vypsání: 2017/2018
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra buněčné biologie (31-151)
• Vedoucí / školitel: prof. RNDr. Jan Černý, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 15.11.2017
• Datum zadání: 15.11.2017
• Datum odevzdání elektronické podoby: 08.06.2020
• Datum proběhlé obhajoby: 10.07.2020
• Oponenti: Mgr. Martin Schwarzer, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Cílem práce je zjistit jaké typy buněk a v jakém množství migrují mezi matkou a potomkem během březosti, do kterých míst přednostně migrují a zda se množství mikrochimérních buněk v těle novorozence mění i během kojení.

Specifickými cíly jsou:
•Popsat dynamiku přenosu antigen-prezentujících buněk mezi matkou a fétem/novorozencem s využitím histologických technik umožňujícím kvantitativní analýzu (kombinace clearovacích celotělových / celoorgánových technik s pokročilými mikroskopickými přístupy - light sheet mikroskopie).
•Pochopit, kolik a jakých typů buněk exprimujících MHC II translokuje během březosti/kojení, včetně přesné histologické lokalizace a načasování v průběhu ontogenese.
•Vytvořit celotělové/celoorgánové 3D rekonstrukce mikrochimérních buněčných populací za fyziologických i experimentálních podmínek (využití knock-out modelů – MyD88a a imunodefientních kmenů - nunu).
•Mikroskopická kvantitativní data budou korelována s daty získanými pomocí průtokové cytometrie pro detailní fenotypizaci MHC II+ populací.

Načasování práce:
1. rok - optimalizace metod – izolace a charakterizace buněk z mateřského mléka, clearovacích technik, seznámení se s light-sheet mikroskopií a kvantitativními technikami vyhodnocení mikroskopických dat, příprava kříženců myších geneticky modifikovaných modelů
2. rok – provádění experimentů, analýza dat, testování hypotézy zapojení kojení do přenosu mikrobiální mikroflóry, příprava a analýza 3D modelů mikrochimérních orgánů a tkání

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The aim of this work is to find out what cell types and how much of the particullar cell types migrate between the mother and the offspring during pregnancy, where they migrate preferably, and whether the amount of microchimeric cells in the newborn's body changes during breastfeeding.
The specific objectives are:
• Describe the dynamics of antigen-presenting cell transmission between mother and fetus / neonate using histological techniques enabling quantitative analysis (a combination of clearing whole body / whole organ techniques with advanced microscopic approaches - light sheet microscopy).
• Understand how many and what types of MHC II expressing cells translocate during pregnancy / lactation, including accurate histological location and timing during ontogenesis.
• Create a full-body / full-organ 3D reconstruction of microchimeric cell populations under physiological and experimental conditions (with use of knock-out models - MyD88a and immunodeficiency strains - nunu).
• Microscopic quantitative data will be correlated with data obtained by flow cytometry for detailed phenotyping of MHC II + populations.
Timing of work:
1st year - optimization of methods - isolation and characterization of cells from breast milk, clearing techniques, introduction to light-sheet microscopy and quantitative techniques of evaluation of microscopic data, preparation of hybrids of mouse genetically modified models
2nd year - experimentation, data analysis, breastfeeding hypothesis testing into microbial microflora transmission, preparation and analysis of 3D models of microchimic organs and tissues