Práce se zaměřuje na skupinu NAD+-dependentních histon deacetyláz (HDACs), také označovaných jako sirtuiny (SIRT1-7). Zejména SIRT1, lokalizovaný v buněčném jádře, je zapojen do epigenetických změn DNA a histonů, které předurčují transkripční aktivitu stejně jako odolnost genomu vůči poškození. Byla stanovena hypotéza, že SIRT1 je zapojen do regulace meiotického zrání oocytů, kde ovlivňuje modifikace chromatinu a předurčuje úspěšnost oplození oocytů in vitro. Cílem práce je zhodnotit post-translační modifikace (methylace a acetylace) histonu H3 na lysinu K9 a kvantifikovat fragmentaci DNA po ovlivnění aktivity SIRT1 v oocytech myší (Mus musculus, kmen CD1). Pro studium signalizace SIRT1 bude použit modulátor jeho aktivity BML-278 (100 – 300µM). Pro naplnění cílů budou použity techniky in vitro zrání oocytů, imunofluorescence, TUNEL a konfokální mikroskopie. Data budu podrobena statistické analýze.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
This thesis is focused on a group of NAD+-dependent histon deacetylase (HDACs), also known as sirtuins (SIRT1-7). Notably SIRT1 which is localized in the nucleus and it is involved in epigenetic changes of both DNA and histones. These changes predetermine transcriptional activity and genome stability of the cell. It is hypothesized that SIRT1 is required in the regulation of oocytes maturation, where SIRT1 affects chromatin modification and thereby determinates the success rate of fertilization of oocytes in vitro. The objective of the thesis is to evaluate the post-translational modification (methylation and acetylation) of H3 on K9 and quantification of DNA damage in matured oocytes of mice (Mus musculus, CD1 strain). BML 278 (100 – 300µM), as modulator of SIRT1 activity, will be used during oocyte maturation. The in vitro maturation of oocytes, immunofluorescence, TUNEL and confocal microscopy will be applied for fulfillment of stated objectives. Thereafter, the data will be subjected to statistical analysis.
- zadáno vedoucím/školitelem