In vitro saturačné študie 99mTc-HYNIC-ramucirumabu na SKOV3 bunkách

• Název práce v jazyce práce (slovenština): In vitro saturačné študie 99mTc-HYNIC-ramucirumabu na SKOV3 bunkách
• Název práce v češtině: In vitro saturační studie 99mTc-HYNIC-ramucirumabu na SKOV3 buňkách
• Název v anglickém jazyce: In vitro saturation study of 99mTc-HYNIC-ramucirumab on SKOV3 cell line
• Klíčová slova: 99mTc, HPLC, iTLC, monoklonální protilátka, ramucirumab, radioimunoanalýza, saturace, SKOV3, VEGFR2
• Klíčová slova anglicky: 99mTc, HPLC, iTLC, monoclonal antibody, ramucirumab, radioimmunoassay, saturation, SKOV3, VEGFR2
• Akademický rok vypsání: 2016/2017
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: slovenština
• Ústav: Katedra biofyziky a fyzikální chemie (16-16110)
• Vedoucí / školitel: doc. Mgr. Pavel Bárta, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 07.10.2016
• Datum zadání: 29.11.2016
• Datum a čas obhajoby: 05.06.2018 08:30
• Datum odevzdání elektronické podoby: 11.05.2018
• Datum proběhlé obhajoby: 05.06.2018
• Oponenti: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D.

Zásady pro vypracování

1. Vyhledání dostupných informací k zadané tématice v odborné literatuře a informačních databázích.
2. Osvojení techniky práce s buněčnými kulturami, radioaktivními ligandy a přístroji na oddělení radionuklidové laboratoře.
3. Vyhodnocení získaných výsledků a jejich konfrontace s teoretickými poznatky.
4. Vypracování teoretických poznatků, vlastní experimentální práce, experimentálních výsledků a jejich následné diskuse v diplomové práci v českém jazyce.

Seznam odborné literatury

1. Björke H, Andersson K. Measuring the affinity of a radioligand with its receptor using a rotating cell dish with in situ reference area. Appl Radiat Isot. 2006 Jan;64(1):32-7.
2. Björke H, Andersson K. Automated, high-resolution cellular retention and uptake studies in vitro. Appl Radiat Isot. 2006 Aug;64(8):901-5.
3. Björkelund H, Gedda L, Malmqvist M, Andersson K. Resolving the EGF-EGFR interaction characteristics through a multiple-temperature, multiple-inhibitor, real-time interaction analysis approach. Mol Clin Onc. 2013. 1: 343-352.
4. Björkelund H, Gedda L, Andersson K. Comparing the epidermal growth factor interaction with four different cell lines: intriguing effects imply strong dependency of cellular context. PLoS One. 2011 Jan 31;6(1):e16536.
5. Young K, Smyth E, Chau I. Ramucirumab for advanced gastric cancer or gastro-oesophageal junction adenocarcinoma. Therap Adv Gastroenterol. 2015 Nov;8(6):373-83.

Předběžná náplň práce

Student se seznámí se současnými poznatky v oblasti problematiky nádorových onemocnění (angiogeneze) a v oblasti kinetiky receptorových interakcí v in vitro prostředí prostřednictvím odborné literatury a informačních databází. Dále si osvojí práci s buněčnou kulturou a její následné využití pro buněčné experimenty. V oblasti experimentů se zaměří na receptor-ligand interakce a s tím spojené stanovení kinetického parametru jako je disociační konstanta (Kd). Jako cílový receptor na primární buněčné kultuře se v experimentech bude používat receptor pro vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGFR). Student bude pracovat v prostředí radionuklidové laboratoře, proto si osvojí bezpečnost práce s radioaktivními zářiči. V rámci experimentů si sám bude radioaktivně značit příslušný ligand (monoklonální protilátku). Značený ligand bude testován na čistotu a stabilitu pomocí ITLC a HPLC metod. Experimenty s radioaktivně značenou protilátkou na buněčné kultuře budou provedeny pomocí klasické manuální techniky a současně pomocí přístroje LigandTracer, umožňující automatickou radioimunoanalýzu v reálném čase. Naměřené hodnoty prostřednictvím manuální techniky se budou vyhodnocovat pomocí programů jako MS Excel a GraphPad Prism a pro automatickou radioimunoanalýzu prostřednictvím programu TraceDrawer. Veškeré teoretické a praktické poznatky stejně tak jako výsledky a jejich diskuse budou shrnuty v diplomové práci.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The master student will search for the current knowledge in the field of cancer disease (angiogenesis) and kinetics of receptor interactions in vitro with the help of scientific literature on the Internet. The master student will work with a cell line and use it in experiments. Experiments will be focused on ligand-receptor interactions with the measurement of dissociation constant (Kd). Vascular epidermal growth factor receptor (EGFR) is going to be the target receptor in experiments with cells. The master student will work in radionuclide laboratory with the appropriate safety rules. The master student will perform the radiolabeling of monoclonal antibody. The radiolabeled antibody will be tested on its purity and stability with the employment of ITLC and HPLC techniques. The experiments with a cell line will be performed by either the manual technique or automated radioimmunoassay represented by LigandTracer technology. The obtained results from the manual technique or radioimmunoassay will be analyzed by MS Office Excel and GraphPad Prism or by TraceDrawer, respectively. The final task for the master student is to summarize the theoretical, practical and measured data in his/her thesis.