Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy

• Název práce v češtině: Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy
• Název v anglickém jazyce: Separation and determination of possible products of enzymatic cleavage of 4-nitrophenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobioside using capillary electrophoresis
• Klíčová slova: kapilární elektroforéza, sacharidy, enzymová kinetika, beta-N-acetylhexosaminidasa
• Klíčová slova anglicky: capillary electrophoresis, saccharides, enzyme kinetics, beta-N-acetylhexosaminidase
• Akademický rok vypsání: 2011/2012
• Typ práce: bakalářská práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra analytické chemie (31-230)
• Vedoucí / školitel: doc. RNDr. Tomáš Křížek, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 08.11.2011
• Datum zadání: 08.11.2011
• Datum odevzdání elektronické podoby: 31.05.2012
• Datum proběhlé obhajoby: 19.06.2012
• Oponenti: doc. RNDr. Květa Kalíková, Ph.D.
• Konzultanti: prof. RNDr. Pavel Coufal, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Cílem práce bude vývoj a optimalizace elektroforetické separace produktů, které mohou vznikat hydrolýzou 4-nitrofenyl-N,N’-diacetyl-β-D-chitobiosidu enzymem β-N-acetylhexosaminidasou. K vývoji metody bude využita kapilární zónová elektroforéza s přímou UV detekcí. Nejprve budou optimalizovány podmínky separace, především složení základního elektrolytu, jeho pH a iontová síla. Poté bude u optimalizované metody otestována reprodukovatelnost měření, limity detekce apod. Vyvinutá metoda bude sloužit k porovnání aktivity enzymů při hydrolýze přirozeného substrátu a tzv. chromogenního substrátu, který se často při studiu enzymové kinetiky používá.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The aim of this work is development and optimization of electrophoretic separation of products that can arise from hydrolysis of 4-nitrophenyl-N,N’-diacetyl-β-D-chitobioside by β-N-acetylhexosaminidase enzyme. For development of the method, capillary electrophoresis with direct UV detection will be employed. At first, separation conditions will be optimized, namely background electrolyte composition, pH and ionic strength. Subsequently, reproducibility of the optimized method, limits of detection etc. will be tested. The developed method will serve for comparison of enzymatic activity towards natural substrate and chromogenic substrate, that is frequently used for enzyme kinetics studies.