HEK293 je lidská buněčná linie odvozená z embryonálních buněk ledvin a je často využívaným systémem pro výrobu rekombinantních proteinů. Tato práce se zabývala optimalizací složení bezsérového média pro HEK293S a HEK293T linie za účelem náhrady drahých komerčních médií. Indikátorem byl růst kultury a exprese reportérových proteinů SEAP a GFP. Podařilo se mi vytvořit nové médium, které mimo jiné obsahovalo insulin (1 mg/l), transferin (5 mg/l) a směs stopových prvků. Při kultivaci ve směsi komerčního média EX-CELL 293 s mým novým médiem se buňky linie 293S množily rychleji než v komerčních médiích (doba zdvojení 20,47 ± 2,68 hodin (srel = 13,1 %)). Zdá se, že je nové médium vhodné také pro transfekci HEK293 linií a poskytuje relativně vysokou expresi rekombinantních proteinů. Transfekční poměr DNA:PEI (w/w) pro toto médium je 1:2 až 1:3.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
HEK293 is a human cell line derived from embryonic kidney cells and is a frequently used system for the production of recombinant proteins. This work dealt with optimization of the composition of serum-free medium for HEK293S and HEK293T cell lines as a compensation for expensive commercial media. The growth of culture and expression of reporter proteins SEAP and GFP was monitored as the markers. I managed to create a new medium which contained, among other compounds, insulin (1 mg/l), transferrin (5 mg/l) and a mixture of trace elements. During the cultivation in a mixture of commercial medium EX‑CELL 293 with my new medium 293S cells grew faster than during the cultivation in commercial media (doubling time 20,47 ± 2,68 hours (srel = 13,1 %)). It seems that the new medium is suitable for transfection of HEK293 cell lines with a relatively high expression of recombinant proteins. Transfection ratio of DNA:PEI (w/w) for this medium is 1:2 to 1:3.
- zadáno vedoucím/školitelem