Příprava dimerní formy myšího NK buněčného receptoru NKR-P1C

• Název práce v češtině: Příprava dimerní formy myšího NK buněčného receptoru NKR-P1C
• Název v anglickém jazyce: Preparation of dimeric form of mouse NK cell receptor NKR-P1C
• Klíčová slova: NKR-P1C, lektin, receptor, dimer, HEK293, LB medium, ZYP-5052, inkluzní tělíska
• Klíčová slova anglicky: NKR-P1C, lectin, receptor, dimer, HEK293, LB medium, ZYP-5052, inclusion bodies
• Akademický rok vypsání: 2011/2012
• Typ práce: bakalářská práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra biochemie (31-250)
• Vedoucí / školitel: RNDr. Ondřej Vaněk, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 27.10.2011
• Datum zadání: 27.10.2011
• Datum odevzdání elektronické podoby: 24.05.2012
• Datum proběhlé obhajoby: 07.06.2012
• Oponenti: RNDr. Marek Ingr, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Příprava dimerní rozpustné formy lektinového receptoru myších NK buněk NKR-P1C rekombinantní expresí pomocí tranzietní transfekce buněčné linie HEK293. Produkce fúzního konstruktu receptoru a následná purifikace dimerní formy receptorů pomocí afinitní a HPLC chromatografie, štěpení fúzního proteinu TEV proteasou. Příprava NKR-P1C proteinu renaturací z inkluzních tělísek exprimovaných v buňkách E. coli kultivovaných v LB médiu s induktorem IPTG anebo v autoindukčním médiu ZYP-5052. Porovnání těchto způsobů přípravy dimerní rozpustné formy lektinového receptoru NKR-P1C.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Preparation of dimeric soluble form of lectin receptor of mouse NK cells NKR-P1C by recombinant expression using transient transfection of HEK293 cell line. Production of receptor fusion construct and subsequent purification of dimeric receptor by affinity and HPLC chromatography, cleavage of the fusion construct with TEV protease. Preparation of NKR-P1C protein by refolding from inclusion bodies expressed in E. coli grown in LB medium with IPTG induction or in autoinduction ZYP-5052 medium. Comparison of these two ways of preparation of soluble dimeric form of mouse NKR-P1C receptor.