Imunologické vlastnosti chimerických partikulí odvozených od polyomavirů

• Název práce v češtině: Imunologické vlastnosti chimerických partikulí odvozených od polyomavirů
• Název v anglickém jazyce: Immunological properties of polyomavirus VLPs
• Klíčová slova: VLP, imunita, polyomavirus
• Klíčová slova anglicky: VLP, immunity, polyomavirus
• Akademický rok vypsání: 2011/2012
• Typ práce: disertační práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra genetiky a mikrobiologie (31-140)
• Vedoucí / školitel: RNDr. Alena Drda Morávková, MBA, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 04.10.2011
• Datum zadání: 04.10.2011
• Konzultanti: doc. RNDr. Jitka Forstová, CSc.

Předběžná náplň práce

Hlavní kapsidový protein polyomavirů (VP1) je schopen se samovolně uspořádávat do virům podobných nanočástic (virus-like particles, VLPs). V laboratoři molekulární virologie byly recentně připraveny dva typy chimerických VLPs z VP1 proteinu myšího polyomaviru (MPyV), nesoucí epitopy odvozené z Melan-A/MART-1 (VLPs-Melan-A/MART-1) proteinu. Zároveň byly zkonstruovány chimerické nanočástice nesoucí ve stejném místě epitop kuřecího ovalbuminu (VLPs-OVA).
Projekt bude zaměřen na výzkum jejich imunostimulačních účinků a na vyhodnocení jejich potenciálu pro preventivní a terapeutickou vakcinaci melanomu.
VLPs-Melan-A/MART-1 budou použity k imunizaci myší nebo inkubovány in vitro s dendritickými buňkami, které budou následně aplikovány myším. Stejným způsobem budou použity VLPs-OVA, které v tomto experimentálním uspořádání slouží jako pozitivní kontrola imunitní odpovědi na vložený epitop. U zvířat bude testována imunitní odpověď na buněčné i humorální úrovni. Hladinu sérových protilátek bude stanovena metodou ELISA a bude určena jejich afinita k buňkám melanomové linie B16-F10. Podíl neutralizačních protilátek bude určen hemaglutinačním testem. Schopnost T-lymfocytů specificky zabíjet fluorescenčně označené cílové buňky bude vyhodnocena průtokovou cytometrií. Dále bude měřena produkce lymfokinů a schopnost proliferace splenocytů imunizovaných zvířat in vitro po stimulaci dendritickými buňkami aktivovanými příslušným epitopem. V případě pozitivních výsledků in vitro testů budou in vivo testovány ochranné účinky chimerických nanočástic na myších vystavených letální dávce syngenních melanomových buněk

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Polyomavirus major capsid protein (VP1) is able to spontaneously self-assemble into virus-like particles (VLPs). Two types of chimeric VLPs of mouse polyomavirus (MPyV) carrying epitopes derived from Melan-A/MART-1 (VLPs-Melan-A/MART-1) protein were recently prepared in the laboratory of molecular virology. At the same time were constructed chimeric nanoparticles with the chicken ovalbumin epitope (VLPs-OVA).
The aim of this project is to examine their immunomodulatory effects and potential for preventive and therapeutic melanoma vaccination.
Mice will be imunized with VLPs-Melan-A/MART-1 or with VLPs-Melan-A/MART-1 in vitro pulsed dendritic cells. In the same way will be used VLPs-OVA as a positive control of immune responses to the inserted epitope. Animals will be tested for immune response at cellular and humoral level. Serum antibody levels will be determined and their affinity to melanoma cells B16-F10 will be assessed. The proportion of neutralizing antibodies will be defined by hemagglutination. The ability of T-lymphocytes to specifically kill fluorescently labeled target cells will be evaluated by flow cytometry. Lymphokines production and lymphocyte proliferation after in vitro stimulation by dendritic cells pulsed with corresponding epitope will be measured. If positive results in vitro are obtained, protective effects of chimeric nanoparticles in vivo will be tested.