Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (30.09.2016)
Praktikum zajišťují: Helena Ryšlavá, Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Petr Novák, Petr Pompach, Josef Chmelík, Renata Ptáčková, Michal Rosůlek, Lukáš Slavata, Petra Darebná
Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami. Metodou, která má široké uplatnění v biochemii, je gelová chromatografie, studenti separují protein ze směsi nebo stanoví relativní molekulovou hmotnost neznámého proteinu. Separace proteinů a stanovení relativní molekulové hmotnosti se provádí rovněž elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS. Velká pozornost je věnována zásadám práce s enzymy: stanovení specifické aktivity enzymu, zjištění afinity enzymu k substrátu, stanovení maximální rychlosti reakce, pH optima, sledování časového průběhu reakce a vliv inhibitorů a aktivátorů na enzymovou reakci. Přítomnost izoenzymů je demonstrována na příkladu laktátdehydrogenasy, kterou studenti separují v polyakrylamidovém gelu za nativních podmínek a detekují enzymovou aktivitu v gelu.
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (30.09.2016)
Practical course in biochemistry is provided by Helena Ryšlavá, Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Petr Novák, Petr Pompach, Josef Chmelík, Renata Ptáčková, Michal Rosůlek, Lukáš Slavata, Petra Darebná
Students are dealing with basic biochemical methods. There are methods used for protein and nucleic acid isolation and
their characterization (extraction, centrifugation, precipitation, dialysis). Gel filtration are used for protein purification from a complex mixture. The students have to determine the relative molecular mass of a protein by SDS polyacrylamide electrophoresis.
Literatura
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Laboratorní cvičení z biochemie, editoři: Doc. RNDr. M. Kodíček, CSc. a Doc. RNDr. O. Valentová, CSc.; Praha 2000
Požadavky ke zkoušce
Poslední úprava: RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. (06.10.2015)
- práce na úloze bude umožněna jen studentům, kteří prokážou dostatečné porozumění principům - před odchodem je nutné nahlásit získané výsledky - vytištěný protokol odevzdat nejpozdeji na začátku příštích praktik, jinak úloha propadá - po případné dohodě s dozorem praktik je možné odevzdat elektronickou verzi protokolu, poslat emailem nejpozději 24 h (soboty, neděle a svátky se nepočítají) před konáním dalších praktik - v případě oprav musí být protokol bez vad schválen do tří týdnů od vypracování úlohy, jinak úloha propadá - k zápočtovému testu může scházet nejvýše jeden schválený protokol - pro získání zápočtu je třeba absolvovat prezentaci vybrané úlohy splnit podmínky závěrečného testu mít protokoly ke všem úlohám schváleny a odevzdat je vrátit klíč od skříňky na chodbě
Sylabus -
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Toto praktikum je určeno pro studenty chemie životního prostředí. Praktikum zajišťují:Helena Ryšlavá, Daniel Kavan, Veronika Hýsková, Petr Novák, Petr Pompach, Josef Chmelík, Renata Ptáčková, Michal Rosůlek, Lukáš Slavata
Studenti se seznámí se základními biochemickými metodami. Jedná se jednak o metody používané při izolaci proteinů a nukleových kyselin jednak o metody, které slouží k jejich charakterizaci.
Osnova
Gelová chromatografie
Elektroforéza v polyakrylamidovém gelu v prostředí SDS
Práce s enzymy - určení Michaelisovy konstanty, pH optima, specifické aktivity, detekce enzymové aktivity v gelu
Poslední úprava: RNDr. Veronika Hýsková, Ph.D. (05.10.2015)
Gel chromatography
SDS - polyacrylamide gel electrophoresis
Practical enzymology - enzyme kinetics and enzyme characteristics, apparent Michaelis constants, pH optimum, specific activities, detection of the enzyme activity in gels
