Construction of various types of vaccines based on the structural proteins of mouse polyomavirus and analysis of immune response after their administration to mice
Příprava různých typů vakcín založených na strukturních proteinech myšího polyomaviru a testování imunitní odpovědi myší po jejich aplikaci
rigorózní práce (UZNÁNO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/32925Identifikátory
SIS: 98793
Kolekce
- Kvalifikační práce [19125]
Autor
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Genetika, molekulární biologie a virologie
Katedra / ústav / klinika
Katedra genetiky a mikrobiologie
Datum obhajoby
25. 11. 2010
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Angličtina
Známka
Uznáno
Modelové kapsidy odvozené od myšího polyomaviru nesoucí zelený fluorescenční protein (EGFP-VLPs) byly připraveny a použity k intranasální imunizaci myší. EGFP- VLPs navodily silnou protilátkovou odpověď proti VP1, ale ne proti EGFP. In vitro restimulace dendritickými buňkami aktivovanými VP1 nebo EGFP antigenem navodila proliferaci T-buněk a produkci IL-2 a IFN-, která byla specifická jak pro VP1, tak pro EGFP. Překvapivě nebyla detekována žádná specifická cytotoxická aktivita proti VP1 a EGFP proteinu. Po intranasální aplikaci EGFP-VLPs a také po infekci myší polyomavirem bylo pozorováno snížení počtu CD4+CD25+Foxp3+ T buněk ve slezině, ale ne v lymfatických uzlinách a periferní krvi. Z toho plyne, že myší polyomavirus a i od něho odvozené VLPs mají schopnost vyvolat změny v distribuci regulačních T buněk. Přítomnost inhibitorů proteasomu a endo-lysosomální acidifikace způsobila významnou inhibici v presentaci exogenních EGFP-VLPs antigenů v kontextu MHC II třídy. Tyto výsledky prokazují, že EGFP protein transportován prostřednictvím VLPs je dopraven do buňky, degradován na peptidy a presentován na MHC II třídy. Na základě modelových EGFP-VLPs byly připraveny kapsidy nesoucí uvnitř fragment lidského proteinu Bcr-Abl chronické myeloidní leukémie. Sekvence 171 aminokyselin pokrývající zlomovou...
|Abstract Model mouse polyomavirus like-particles carrying enhanced green fluorescence protein (EGFP-VLPs) were prepared and used for intranasal immunization of mice. EGFP-VLPs induced strong anti-VP1 but not anti- EGFP antibody production. In vitro restimulation with antigen-pulsed bone marrow-derived dendritic cells (BMDCs) induced remarkable T-cell proliferative response specific for both VP1 and EGFP antigen and IL-2 and IFN-_ production. Surprisingly, no specific cytotoxic activities against VP1 and EGFP proteins were detected. After intranasal administration of EGFP-VLPs, as well as after polyomavirus infection, a moderate reduction of CD4+CD25+Foxp3+ T cells was observed in spleens but not in lymph nodes and peripheral blood, suggesting that both MPyV virions and VLPs are able to induce changes in distribution of regulatory T cells. Treatment of EGFP-VLPs pulsed BMDCs with inhibitors of endosomal acidification proved that presentation of peptides on MHCgp class II is dependent on acidic endosomal environment. Substantial decrease of CD4-specific T-cell proliferation in the presence of proteasome inhibitor suggests that MHCgp class II might load VPL-derived peptides processed by proteasomes. Based on the model EGFP-VLPs, mouse polyomavirus-like particles carrying inside a fragment of the Bcr-Abl...