velikost textu

Biologický význam tyrozínovej fosforylácie v SH3 doméně proteínu CAS

Upozornění: Informace získané z popisných dat či souborů uložených v Repozitáři závěrečných prací nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora.
Název:
Biologický význam tyrozínovej fosforylácie v SH3 doméně proteínu CAS
Název v češtině:
Biologický význam tyrozínové fosforylace v SH3 doméně proteinu CAS
Název v angličtině:
The biological importance of CAS SH3 domain tyrosine phosphorylation
Typ:
Diplomová práce
Autor:
RNDr. Radoslav Janoštiak, Ph.D.
Vedoucí:
doc. RNDr. Jan Brábek, Ph.D.
Oponent:
RNDr. Michal Dvořák, CSc.
Id práce:
66008
Fakulta:
Přírodovědecká fakulta (PřF)
Pracoviště:
Katedra buněčné biologie (31-151)
Program studia:
Biologie (N1501)
Obor studia:
Buněčná a vývojová biologie (NBUNVYB)
Přidělovaný titul:
Mgr.
Datum obhajoby:
17. 9. 2010
Výsledek obhajoby:
Výborně
Jazyk práce:
Slovenština
Klíčová slova:
p130Cas, SH3 doména, tyrozínová fosforylácia, invazivita, migrácia, fokálne adhézie
Klíčová slova v angličtině:
p130Cas, SH3 domain, tyrosine phosphorylation, invasiveness, migration, focal adhesions
Abstrakt:
Abstrakt Proteín CAS je hlavný tyrozín-fosforylovaný proteín v bunkách transformovaných virovými onkogénmi v-src a v-crk. Je to multidoménový adaptorový proteín slúžiaci ako lešenie pre zostavovanie signálnych komplexov dôležitých pre migráciu a invazivitu Src-transformovaných buniek. V N-koncovej SH3 doméne proteínu CAS bolo identifikované nové fosforylačné miesto – tyrozín 12 nachádzajúci sa na väzbovom povrchu SH3 domény. Pre štúdium biologického významu fosforylácie tyrozínu 12 boli pripravené nefosforylovateľná ( Y12F ) a fosfomimikujúca ( Y12E ) mutanta proteínu CAS. Zistili sme, že fosfomimikujúca mutácia Y12E znižuje asociáciu s kinázou FAK a fosfatázou PTP-PEST a taktiež znižuje tyrozínovú fosforyláciu kinázy FAK. Pomocou GFP značeného proteínu CAS sme následne zistili, že Y12E mutácia delokalizuje proteín CAS z fokálnych adhézií, pričom však nemá žiadny vplyv na lokalizáciu CAS do podozómov. Nefosforylovateľná mutácia Y12F zapríčiňuje hyperfosforyláciu substrátovej domény CAS a znižuje dynamiku fokálnych adhézií a s tým spojenú migračnú kapacitu myších embryonálnych fibroblastov ( MEF ) nezávisle na integrínovej signlizácii. Analogicky k migrácii, CAS Y12F znižuje i invazivitu Src-transformovaných MEF. Z výsledkov tejto diplomovej práce vyplýva dôležitosť fosforylácie Tyr 12 v SH3 doméne CAS pre dynamiku fokálnych adhézií a s ňou spojenú migráciu a invazivitu MEF.
Abstract v angličtině:
Abstract Protein CAS is a major tyrosine-phosphorylated protein in cells transformed by v-crk and v-src oncogenes. It is a multidomain adaptor protein, which serves as a scaffold for assembly of signalling complexes which are important for migration and invasiveness of Src-transformed cells. A novel phosphorylation site in N-terminal SH3 domain was identified – tyrosine 12 located on binding surface of CAS SH3 domain. To study biological importance of tyrosine 12 phosphorylation, non-phosphorylable (Y12F) and phosphomimicking ( Y12E) mutant of CAS were prepared. We found that phosphomimicking mutation Y12E leads to decreased interaction of CAS SH domain with kinase FAK a phosphatase PTP-PEST and also reduce tyrosine phosphorylation of FAK. Using GFP-tagged CAS protein, we show that Y12E mutation caused delocalization of CAS from focal adhesion but has no effect on localization of CAS to podosome-type adhesion. Non-phosphorylable mutation Y12F cause hyperphosphorylation of CAS substrate domain and decrease turnover of focal adhesion and associated cell migration of mouse embryonal fibroblasts (MEFs) independent to integrin singalling. Analogically to migration, CAS Y12F decrease invasiveness of Src-transformed MEF. The results of this diploma thesis show that phosphorylation of Tyr12 in CAS SH3 domain is critically important for focal adhesion dynamics and associated migration and invasiveness of MEF.
Dokumenty
Stáhnout Dokument Autor Typ Velikost
Stáhnout Text práce RNDr. Radoslav Janoštiak, Ph.D. 2.63 MB
Stáhnout Abstrakt v českém jazyce RNDr. Radoslav Janoštiak, Ph.D. 38 kB
Stáhnout Abstrakt anglicky RNDr. Radoslav Janoštiak, Ph.D. 37 kB
Stáhnout Posudek vedoucího doc. RNDr. Jan Brábek, Ph.D. 818 kB
Stáhnout Posudek oponenta RNDr. Michal Dvořák, CSc. 75 kB
Stáhnout Záznam o průběhu obhajoby doc. RNDr. Petr Folk, CSc. 746 kB