velikost textu

Príprava a nasledujúce in vitro saturačné štúdie rádiofarmaka 99mTc-DTPA-ramucirumab na PC-3 bunkách

Upozornění: Informace získané z popisných dat či souborů uložených v Repozitáři závěrečných prací nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora.
Název:
Príprava a nasledujúce in vitro saturačné štúdie rádiofarmaka 99mTc-DTPA-ramucirumab na PC-3 bunkách
Název v češtině:
Příprava a následující in vitro saturační studie radiofarmaka 99mTc-DTPA-ramucirumab na PC-3 buňkách
Název v angličtině:
The preparation and the following in vitro saturation study of the radiopharmaceutical 99mTc-DTPA-ramucirumab on PC-3 cell line
Typ:
Diplomová práce
Autor:
Mgr. Klaudia Sabolová
Vedoucí:
Mgr. Pavel Bárta, Ph.D.
Oponent:
PharmDr. Jiří Janoušek, Ph.D.
Id práce:
198579
Fakulta:
Farmaceutická fakulta v Hradci Králové (FaF)
Pracoviště:
Katedra biofyziky a fyzikální chemie (16-16110)
Program studia:
Farmacie (M5206)
Obor studia:
Farmacie (FAR)
Přidělovaný titul:
Mgr.
Datum obhajoby:
3. 6. 2020
Výsledek obhajoby:
Výborně
Jazyk práce:
Slovenština
Klíčová slova:
99mTc, DTPA, kinetika, monoklonální protilátka, radioimunoanalýza, radioaktivní značení, ramucirumab
Klíčová slova v angličtině:
99mTc, DTPA, kinetics, monoclonal antibody, radioimmunoassay, radiolabelling, ramucirumab
Abstrakt:
ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Študent: Klaudia Sabolová Školiteľ: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Názov diplomovej práce: Príprava a nasledujúce in vitro saturačné štúdie rádiofarmaka 99mTc-DTPA-ramucirumab na PC-3 bunkách V liečbe nádorových ochorení sa do popredia dostáva imunoterapia, ktorá má oproti chemoterapii a rádioterapii nižšie riziko vzniku nežiadúcich účinkov na zdravé tkanivá. Imunoterapia zahrňuje aplikáciu monoklonálnych protilátok cielených proti niektorým nádorovým antigénom. Využívajú sa buď nekonjugované monoklonálne protilátky alebo konjugované s vhodnou efektorovou zložkou, ako je napríklad rádionuklid. Významnú úlohu v patogenéze nádorového ochorenia má angiogenéza. Angiogenéza je regulovaná hlavne interakciami medzi vaskulárnymi rastovými faktormi (VEGFs) a VEGF receptormi (VEGFR). Hlavným regulátorom angiogenézy je VEGF-A.Blokádou interakcie VEGF-A na jeho receptory VEGFR-1 a VEGFR-2 sa inhibuje angiogenéza, a tým aj rast nádorov. Ramucirumab je monoklonálna protilátka, ktorá blokuje túto interakciu, tým že sa s vysokou afinitou viaže na extracelulárnu doménu VEGFR-2. Predkladaná diplomová práca bola zameraná na prípravu rádioaktívne značenej protilátky ramucirumab pomocou rádiodiagnostického nuklidu s následným in vitro testovaním. 99mTc-DTPA-ramucirumab Experimentálna práca zahŕňala prípravu rádiofarmaka metódou nepriameho značenia monoklonálnej protilátky ramucirumab rádionuklidom 99mTc cez chelatotvorné činidlo kyselinu dietyléntriaminpentaoctovú (DTPA). Pomocou metódy Arsenaso III bol určený počet molekúl chelatotvorného činidla DTPA naviazaného na monoklonálnu protilátku ramucirumab. Ďalej bola u pripraveného rádioimunokonjugátu overená rádiochemická čistota pomocou metód instantnej tenkovrstvej chromatografie (iTLC) a vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC). Pomocou in vitro saturačných štúdií bola stanovená afinita pripraveného rádiofarmaka k receptoru VEGFR-2 a bola stanovená aj hodnota rovnovážnej disociačnej konštanty KD. Výsledkom meraní metódou Arsenaso III bolo, že na jednu molekulu protilátky ramucirumab bolo v priemere naviazaných cca sedem molekúl DTPA, čo sa považuje za optimálny počet. Rádiochemická čistota pripraveného rádioimunokonjugátu bola stále vyššia ako 90%. Metódy iTLC a HPLC potvrdili nízku prítomnosť rádiochemických nečistôt. Priemerná hodnota KD získaná pomocou in vitro saturačných štúdii bola 43,39 ± 3,37 nM, ktorá bola nižšia než pre natívny, teda neznačený ramucirumab. Avšak afinita rádiofarmaka k cieľovému receptoru VEGFR-2 bola stále dostatočná. Výsledky tejto práce potvrdili možnosť rádioaktívne značiť monoklonálnu protilátku 99mTc ramucirumab rádionuklidom cez chelatotvorné činidlo DTPA, a to poskytlo základ pre prípravu ďalšieho rádioaktívne značeného imunokonjugátu tejto protilátky, ale už za použitia rádiodiagnostického nuklidu s dlhším fyzikálnym polčasom.
Abstract v angličtině:
ABSTRACT Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biophysics and Physical Chemistry Student: Klaudia Sabolová Supervisor: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Title of diploma thesis: The preparation and the following in vitro saturation study of the radiopharmaceutical 99mTc-DTPA-ramucirumab on PC-3 cell line In cancer treatment, immunology is given prominence, which compared with chemotherapy and radiotherapy has a lower risk of side effects on healthy tissues. Immunotherapy includes application of monoclonal antibodies aimed at some tumour antigens using either non conjugated monoclonal antibodies or conjugated ones with an appropriate effector element, such as radionuclide. Angiogenesis plays the important role in pathogenesis of tumour diseases. Angiogenic process is regulated mostly by the interactions among vascular growth factors (VEGFs) and VEGF receptors (VEGFR). The main regulator of angiogenesis is VEGF-A. The blocking of the interaction among VEGF-A and its receptors VEGFR-1 and VEGFR-2 inhibits angiogenesis, and so does the growth of tumours. Ramucirumab is the monoclonal antibody with antiangiogenic effect, which blocks this interaction by its binding to the extracellular VEGFR-2 domain with high affinity. The presented study is focused on ramucirumab radiolabelling with diagnostic radionuclide followed by in vitro testing. Experimental work included the preparation of the radipharmaceutical 99mTc-DTPA-ramucirumab using the method of indirect labelling of the monoclonal 99mTc antibody with via chelating agent diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA). The number of DTPA molecules conjugated to ramucirumab was assessed with the use of Arsenaso III method. Further, the radiochemical purity of the prepared radioimmunoconjugate was verified by instant thin layer chromatography (iTLC) and highly effective liquid chromatography (HPLC) technique. In vitro saturation study for ramucirumab affinity to VEGFR-2 was analyzed and the value of equvilibrium dissociation rate constant (KD) was found. The use of Arsenaso III method found the average number of bound DTPA molecules to one ramucirumab molecule, which was approximately 7 and was considered as optimal. Radiochemical purity of the prepared radioimmunoconjugate was over 90%. iTLC and HPLC techniques confirmed a low presence of radiochemical impurities. The average value of KD obtained with the use of in vitro saturation method was 43,39 ± 3,37 nM, which was lower than for native ramucirumab. However, the found affinity of the prepared radiopharmaceutical towards target receptor VEGFR-2 was still sufficient. The results summarized in this thesis confirmed the possibility of monoclonal 99mTc antibody ramucirumab indirect radiolabelling with radionuclide via the chelating agent DTPA. Moreover, the presented study also provided the base for another intended preparation of radioactively labelled immunoconjugate of ramucirumab, but with radiodiagnostic nuclide of longer physical halftime.
Dokumenty
Stáhnout Dokument Autor Typ Velikost
Stáhnout Text práce Mgr. Klaudia Sabolová 2.26 MB
Stáhnout Abstrakt v českém jazyce Mgr. Klaudia Sabolová 141 kB
Stáhnout Abstrakt anglicky Mgr. Klaudia Sabolová 140 kB
Stáhnout Posudek vedoucího Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. 95 kB
Stáhnout Posudek oponenta PharmDr. Jiří Janoušek, Ph.D. 133 kB
Stáhnout Záznam o průběhu obhajoby Dipl.-Math Erik Jurjen Duintjer Tebbens, Ph.D. 154 kB