|
|
|
||
Přednáška popisuje hlavní metody genového inženýrství eukaryotických a
prokaryotických organizmů :Izolace nukleových kyselin, chemická a biochemická syntéza nukleových kyselin včetne PCR a RTPCR, degradace a modifikace DNA, rekombinace DNA in vitro, transformace buněk, strategie selekce rekombinantních molekul, virů a buněk, místně specifické mutageneze a mutageneze in vivo, konstrukce knihoven DNA a hledání v nich,exprese cizorodých genů,umlčování genů pomocí RNA interference, konstrukce vektorů, sekvencování.Metody a strategie jsou demonstrovány většinou na Escherichia coli a Saccharomyces cerevisiae. Povinná nebo doporučená časová posloupnost s ostatními kursy: Po absolvování základního kursu Molekulární biologie Další informace: Doporučuje se využít nabídky speciálního cvičení a Praktika z molekulární biologie, které na přednášku navazují Další informace: Doporučuje se využít nabídky speciálního cvičení a Praktika z molekulární biologie, které na přednášku navazují Poslední úprava: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press Sambrook J., Russell D.W., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press Vondrejs V. (1997, 2001, 2003, 2011), Genové inženýrství I-IV, Karolinum Brown T.A. (2006, 2010) Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction; Blackwell Publishing Incorporated
The Biotol team: Techniques for Engineering Genes 1994, Butterworth and Heinemann Press
Prezentace k přednášce, které jsou přihlášeným studentům dostupné na http://web.natur.cuni.cz/~pospisek/vyuka/vyuka.htm, přístupový klíč je studentům sdělen vždy na začátku přednáškového cyklu. Poslední úprava: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
Zkouška je písemná, znalosti vyžadované k jejímu úspěšnému složení vycházejí z probírané látky. Na položené otázky (celkem 10) je třeba vypsat odpověď, nejedná se tedy o prosté zaškrtávání odpovědí. Časový limit testu je 120 minut. Bodové hodnocení odpovědí vychází z náročnosti otázek (za jednotlivé otázky lze získat 5-3-3-2-2-2-1-1-1 bodů, celkem 20 bodů). Klasifikace je následující: 18-20 bodů = výborně; 15-17,5 bodu = velmi dobře; 12-14,5 bodu = dobře; méně než 12 bodů = neprospěl. Poslední úprava: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
1. Porovnání klasických a netradičních metod genových manipulací 2. Metody založené na indukované fúzi protoplastů 3. Základní posloupnost kroků pro umělý přenos genetické informace mezi buňkami pomocí metod genového inženýrství 4. Varianty vstupu do posloupnosti, chemická syntéza DNA, biochemická syntéza DNA (PCR, reverzní transkripce, RTPCR) 5. Metody izolace DNA (RNA) z virů, organel a buněk 6. Metody degradace DNA (mechanická, enzymová, restrikční endonukleázy) 7. Enzymy pro syntézu, modifikace, spojování a úpravy konců DNA 8. Rekombinace fragmentů s vektorem in vitro 9. Vnášení DNA do organismů (infekce, indukovaná fúze, transformace, transdukce) 1O.-11. Genové inženýrství u bakterií na příkladu E. coli. Virové a plazmidové vektory, strategie klonování, sekvencování, transkripce, exprese cizorodých genů, knihovnictví, cílená mutageneze, amplifikace DNA, selekce transformovaných klonů, konstrukce speciálních vektorů 12. -13.Genové inženýrství u kvasinek na příkladu S. cerevisiae, vektory, strategie využití podvojných vektorů, exprese, sekrece, YAC vektory, knihovnictví, genové manipulace in vitro (integrativní vektory), léčení genetických chorob, izolace genů, cílená mutageneze in vitro, manipulace na úrovni in vivo 14. Specifické rysy genových manipulací u mnohobuněčných organismů Příprava dsRNA a umlčování genů pomocí RNA interference,genová terapie Poslední úprava: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|