Předměty

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (07.10.2020)

Přednáškový kurz (1/3) a cvičení (2/3) jsou zaměřeny na získání znalostí pro práci s buněčnými a tkáňovými kulturami živočichů. Důraz je kladen, jak na odborné znalosti, tak na technické vybavení a bezpečnost. V první části kurzu je probíráno vybavení laboratoře, materiály a jejich vlastnosti, voda, sterilizace, média a suplementy pro živočišné kultury. Druhá část kurzu je zaměřena na založení a udržování kultury včetně disagregace buněk. Dále pak na frakcionaci buněk, pozorování a měření buněk, stanovení proteinů a DNA, histochemické a karyologické techniky. Součástí kurzu je i transfekce buněk, imortalizace kultur a nádorová transformace. Praktická cvičení jsou turnusová.

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (07.10.2020)

During the anti-epidemic measures, the lectures take place online according to the schedule through the Microsoft Teams communication platform.
Practice takes place in person in shifts of 10 students.

Theory and practice of cell and tissue culture. 1/3 of lectures, 2/3 practical class. Materials, sterilization, aseptic technique, media, supplements, disagregation, maintenance of lines, preservation, transformation, cell separation, measurement and quantitation, differentiation, culture of specific cells, gene transfer, karyology.

Poslední úprava: RNDr. Nataša Šebková, Ph.D. (21.02.2018)

Freshney, R. Ian: Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, 7th Edition. Wiley-Blackwell, 2016 (ISBN: 978-1-118-87365-6).

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (07.10.2020)

Zápočet: 100% účast na praktických cvičení; zápočet je podmínkou pro složení zkoušky.
Zkouška: ústní, cca 30 min, studentům je umožněna písemná příprava (cca 10 min ).

Požadavky ke zkoušce v době protiepidemických opatření zůstávají (zatím) stejné.

Poslední úprava: RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D. (07.10.2020)

Credit from practical courses: 100% presence.
Oral exam.

The exam requirements at the time of anti-epidemic measures remain (so far) the same.

Poslední úprava: RNDr. Jana Rubešová, Ph.D. (05.09.2019)

Přednáška :

1. Vybavení: sterilní místnost, box, laminární box, termostat, CO2 termostat.

2. Materiály a jejich vlastnosti: sklo, polyethylen, polypropylen, polystyren, PVC, teflon, fenolformaldehyd, guma, silikon, kovy, buničina, papír.

3. Voda: znečištěniny, destilace, reversní osmóza, deionizace, aktivní uhlí, sterilizace.

4. Kontaminace.

5. Aseptická technika.

6. Mytí a úprava povrchu.

7. Sterilizace: suché a vlhké teplo, ozáření, filtrace, plyny a páry, desinfekce povrchů.

8. Základní podmínky života: osmolarita, pH, pufrování, CO2, teplota.

9. Média a suplementy: balancované solné směsi, média, glutamin, antibiotika, bikarbonát, sérum, bezsérová média.

10. Typy kultur: tkáňové, buněčné, kmenové buňky, linie, růst a evoluce kultury.

11. Primární kultury: zdroje tkání, fragmenty a suspense.

12. Udržování kultury: subkultura, výměna média, disagregace buněk, klonování, zamražování.

13. Frakcionace a separace buněk.

14. Pozorování a měření: hemocytometr, cell counter, kalibrace, histochemie, pozorování a měření NK (DAPI, Hoechst), viabilita a cytotoxicita (dye exclusion, tetrazoliové soli). Stanovení proteinů (Lowry, Bradfordová, UV), stanovení DNA (DAPI, EtBr), značení živých buněk.

15. Karyologie: příprava roztěrů, barvení, pruhování chromozómů, hybridizace in situ.

16. Transformace buněk: nádorová transformace, kontaktní inhibice, imortalizace kultur, buněčná fúze, transfekce buněk (positivní a negativní selekce, GFP, lipofekce, elektroporace), COS buňky.

Praktická cvičení :

1. Příprava primární kultury, příprava média.

2. Udržování kultury: pasážování, zamražování, rozmražování.

3. Klonování v agaru.

4. Karyotyp myši.

5. Kultivace a fixace buněk na skle, imunofluorescenční barvení cytoskeletu buněk.

Předmět je vyučován za podpory projektu Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance pro potřeby trhu práce, reg.č. CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362.

Poslední úprava: RNDr. Jana Rubešová, Ph.D. (14.09.2019)

Lectures:

1. Equipment of the laboratory: sterile area, laminar flow, incubators. Materials: glass, plastic, metals.

Water: contamination, distillation, reverse osmosis, deionization, carbon filtration, sterilization.

2. Washing up. Sterilization. Aseptic techniques. Laboratory safety and biohazards. Contamination: mycoplasmas etc. The culture environment: osmolality, pH, buffering, temperature, gas phase.

3. Cell and tissue cultures: animal culture, feeder layer. Media and supplements: balanced salt solution, defined media, serum, serum-free media, selection of medium and serum, other supplements.

4. Disaggregation of the tissue and primary culture: isolation of the tissue, enzymatic disaggregation, collagenase, filtration, centrifugation. Maintenance of the culture: replacement of medium, cell lines, cloning, cell freezing and thawing.

5. Cell counting: hemocytometer, cell counter, calibration. Methods of cell separation: affinity methods, flow cytophotometry. Histochemistry, quantitation of DNA and proteins.

6. Karyology: chromosome preparation, chromosome banding and painting, hybridization.

7. Cell transformation: immortalization, contact inhibition, cell fusion, gene transfer.

Practical class:

1. Primary culture, preparation of medium.

2. Routine maintenance: replacement of medium, cell freezing and thawing.

3. Cell cloning in the presence of a feeder layer.

4. Chromosome preparation and banding.

5. Immunofluorescence.

The course is taught with the support of the project reg. number CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362