Microinjection and micromanipulation - practical course - MB151C02

• Title: Mikroinjekční a mikromanipulační praktikum
• Czech title: Mikroinjekční a mikromanipulační praktikum
• Guaranteed by: Department of Cell Biology (31-151)
• Faculty: Faculty of Science
• Actual: from 2020
• Semester: winter
• E-Credits: 3
• Examination process: winter s.:
• Hours per week, examination: winter s.:0/2, C [TS]
• Capacity: 20
• Min. number of students: unlimited
• 4EU+: no
• Virtual mobility / capacity: no
• State of the course: taught
• Language: Czech
• Note: enabled for web enrollment
• Guarantor: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D.
• Teacher(s): Mgr. Zuzana Burdíková, Ph.D.; doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D.; Mgr. Marie Macůrková, Ph.D.; RNDr. Tereza Tlapáková, Ph.D.

Annotation

English

Last update: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D. (18.09.2019)

The aim of this practical course is to familiarize students with microinjection and micromanipulation techniques on the model of round worm (C. elegans) and clawed frogs (Xenopus laevis and Xenopus tropicalis). Students will have also the oportunity to work with advanced microscopic systems such as light sheet and live cell immaging microscopy.

Czech

Last update: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D. (18.09.2019)

Cílem praktik je seznámit studenty s mikroinjekčními a mikromanipulačními technikami na modelu háďátka (C. elegans) a drápatky (X. laevis a X. tropicalis). V kurzu bude taktéž využita light sheet a live cell imaging mikroskopie.

Literature

English

Last update: RNDr. Nataša Šebková, Ph.D. (24.10.2019)

Literature will be available at each course.

Czech

Last update: RNDr. Nataša Šebková, Ph.D. (24.10.2019)

Literatura bude k dispozici na každém kurzu.

Requirements to the exam

English

Last update: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D. (26.08.2019)

course attendance, working out the practical course protocols, to be able to communicate in English language.

 

Czech

Last update: RNDr. Nataša Šebková, Ph.D. (21.02.2018)

docházka, vypracování protokolů z cvičení, zvládnout výuku v anglickém jazyce. 

Syllabus

English

Last update: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D. (18.09.2019)

Task 1: RNA interference of the embryonic lethal gene in C. elegans.

 

- C. elegans morphology, principle of the RNA interference

- in vitro synthesis of dsRNA

- preparation of microinjection tools (capillary, pads for the C. elegans immobilization)

- familiarization with the micromanipulator, microinjection process

 

Task 2: Study of migration potential of stem cells

 

- what are stem cells?

- meet Xenopus!

- preparation of RFP positive Sertoli stem cells derived from the testes of X. tropicalis juvenile male for the microinjection

- preparation of media, capillary and microinjection tools

- microinjection of Sertoli stem cells into X. tropicalis tadpoles

- light sheet microscopy - observation of migration routes of microinjected cells in living tadpoles

- preparation of photodocumentation

The course is taught with the support of the project reg. number CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362

Czech

Last update: doc. RNDr. Ing. Vladimír Krylov, Ph.D. (18.09.2019)

Úloha1: RNA interference embryonálně letálního genu u C. elegans

 

- seznámení s morfologií C. elegans, princip RNA interference

- in vitro syntéza dsRNA

- příprava nástrojů pro mikroinjekci (kapiláry, podložky pro imobilizaci C. elgens

- seznámení s mikromanipulátorem, vlastní mikroinjekce

 

Úloha2: Studium migračního potenciálu kmenových buněk

 

- problematika kmenových buněk

- seznámení se s modelovým organizmem Xenopus tropicalis

- příprava RFP pozitivních Sertoliho kmenových buněk odvozených z varlat X. tropicalis a pěstovaných v buněčné kultuře pro mikroinjekční experiment

- analýza buněk před mikroinjekcí pomocí cell counteru

- příprava médií, kapilár a nástrojů pro mikroinjekci

- mikroinjekce Sertoliho kmenových buněk do pulců X. tropicalis

- light sheet mikroskopie - pozorování a záznam migračních tras mikroinjikovaných buněk

- příprava fotodokumentace.

Předmět je vyučován za podpory projektu Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance pro potřeby trhu práce, reg.č. CZ.02.2.69/0.0/0.0/16_015/0002362.