|
|
|
||
|
The course provides a working knowledge of biochemistry, focusing on practical aspects of the field. It covers basic biochemical techniques used in modern experimental biology, e.g. chromatography, spectrophotometry, and electrophoresis applied to the analyses of lipids, carbohydrates, proteins and enzymes in various biological materials. Students are given the opportunity to perform simple biological experiments independently. General outline for each experiment: The introduction - is organized as interactive seminar to update the theoretical background and practice biochemical computations. The experiment - is carried out by students independently (2 in a group). The analysis and presentation of data - written report is prepared by the students. The discussion - interactive seminar to evaluate results and discuss problems. Examples of experiments: 1) Determination of glycogen levels in the mouse liver after starvation. 2) Isolation of recombinant protein, SDS-PAGE electrophoresis. 3) Quantitative analysis of erythrocytes phospholipids in ruminant and non-ruminant mammals.
Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (01.08.2013)
|
|
||
|
Lehninger. Principles of Biochemistry, 3rd edition (2000), ISBN 1-57259-153-6, Nelson, D.L., Cox, M.M. Worth Publishers, New York Voet, D. and Voet, J.: Biochemistry. 3rd ed. (2004), ISBN 0-471-19350-x, John Wiley & Sons, Inc. Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (01.08.2013)
|
|
||
|
Podmínky pro získání zápočtu: 1. Absolvování úvodní přednášky 2. 100% účast na všech úlohách 3. Odevzdání protokolů vyhovujících požadavkům nejpozději do začátku letního semestru Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (09.11.2011)
|
|
||
|
Příklady experimentů: 1) Stanovení koncentrace glykogenu v játrech krysy po hladovění: cílem úlohy je izolovat a stanovit glykogen v játrech krysy. Bude porovnáván obsah glykogenu v játrech dvou jedinců, krysy normálně krmené a krysy krátkodobě hladovějící. Glykogen bude oddělen od mono- a oligosacharidů a hydrolyzován v kyselém prostředí. Výsledná glukóza bude stanovena spektrofotometricky s využitím enzymatického testu. 2) Izolace rekombinantního proteinu, elektroforéza SDS-PAGE: cílem úlohy je izolovat GST-fúzní protein (14-3-3 nebo beta-galaktozidázu) z bakteriální kultury Escherichia coli. Rekombinantní GST-fúzní protein bude izolována z bakteriální kultury E. coli pomocí afinitní chromatografie a následně bude kvalita jednotlivých kroků purifikace ověřena pomocí elektroforézy SDS-PAGE. 3) Fosfolipidy v biologických membránách: cílem úlohy je porovnat výrazně odlišné zastoupení fosfolipidů v membránách erytrocytů přežvýkavých a nepřežvýkavých savců. Fosfolipidy budou rozděleny do základních skupin pomocí chromatografie na tenké vrstvě a relativní zastoupení vybraných fosfolipidových druhů bude stanoveno kvantitativně pomocí denzitometrické analýzy obrazu. Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (24.02.2021)
|
|
||
|
Praktikum slouží k výuce základních návyků práce v biologické a biochemické laboratoři. Řešené úlohy jsou koncipovány tak, aby demonstrovaly určitý biologický fenomén (různé fosfolipidové složení membrán erytrocytů dvou savčích druhů, vliv hladovění na hladinu glykogenu v játrech) nebo základní principy purifikace rekombinantních proteinů a zhodnocení průběhu purifikace. Úspěšný absolvent si osvojí základní návyky a dovednosti nezbytné pro bezpečnou a přesnou práci v laboratoři, jako je přesné pipetování objemů v rozsahu 1 µl – 50 ml, práci s biologickým materiálem, správnou obsluhu laboratorních přístrojů jako jsou různé typy centrifug, spektrofotometr, vakuová rotační odparka, sonikátor nebo aparát na proteinovou elektroforézu. Absolventi kurzu budou schopni zvládnout biologický experiment od začátku jeho plánování k jeho vyhodnocení, formulaci závěrů a diskuzi výsledků v kontextu literárních dat. Důraz je kladen na samostatnost při provádění experimentů, korektní a správné vedení zápisu o pokusu a vypracování protokolů k jednotlivým úlohám. V rámci analýzy výsledku se absolvent naučí i využívat software pro denzitometrickou analýzu a s jeho pomocí analyzovat obrazová data z SDS PAGE a TLC a zopakuje si základy práce s Excel jako je tvorba grafů a výpočet a praktické využití lineární regrese. Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (30.01.2026)
|
|
||
|
Zápis na úvodní přednášku a zápis do turnusů probíhá elektronicky na serveru MOODLE (http://dl2.cuni.cz/). Kurz samotný najdete v nabídce: Přírodovědecká fakulta, Sekce biologie, Katedra buněčné biologie, PBB. Last update: Rösel Daniel, prof. RNDr., Ph.D. (01.08.2013)
|