|
|
|
||
|
The lecture is focused on description of basic methods and strategies exploited in genetic engineering of both caryotic and aucaryotic organisms in vitro, and in vivo. The main groups of methods are isolation of DNA or RNA, chemical and biochemical synthesis of oligonucleotides and polynucleotides, construction of large ds DNA in vitro, degradation and modification of DNA, reverse, transcription, amplification of DNA by PCR, recombination of DNA in vitro, DNA transformation of cells with isolated DNA, analysis of recombinant DNA and selection of recombinant molecules, viruses, cells or multicellular organisms. The main strategies are following: Selection strategies, site-specific and random mutagenesis, deletion mutagenesis, cloning, preparation and exploitation of DNA or c-DNA libraries, expression of foreign genes, constructions of various types of vectors, sequencing and genetic manipulation in vivo. The methods and strategies are demonstrated mostly on E. coli and S. cerevisiae.
References: The Biotol team: Techniques for Engineering Genes 1994 Butterworth and Heinemann Press Last update: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
|
Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press Sambrook J., Russell D.W., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press Vondrejs V. (1997, 2001, 2003, 2011), Genové inženýrství I-IV, Karolinum Brown T.A. (2006, 2010) Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction; Blackwell Publishing Incorporated
The Biotol team: Techniques for Engineering Genes 1994, Butterworth and Heinemann Press
Prezentace k přednášce, které jsou přihlášeným studentům dostupné na http://web.natur.cuni.cz/~pospisek/vyuka/vyuka.htm, přístupový klíč je studentům sdělen vždy na začátku přednáškového cyklu. Last update: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
|
Zkouška je písemná, znalosti vyžadované k jejímu úspěšnému složení vycházejí z probírané látky. Na položené otázky (celkem 10) je třeba vypsat odpověď, nejedná se tedy o prosté zaškrtávání odpovědí. Časový limit testu je 120 minut. Bodové hodnocení odpovědí vychází z náročnosti otázek (za jednotlivé otázky lze získat 5-3-3-2-2-2-1-1-1 bodů, celkem 20 bodů). Klasifikace je následující: 18-20 bodů = výborně; 15-17,5 bodu = velmi dobře; 12-14,5 bodu = dobře; méně než 12 bodů = neprospěl. Last update: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|
|
||
|
1. Porovnání klasických a netradičních metod genových manipulací 2. Metody založené na indukované fúzi protoplastů 3. Základní posloupnost kroků pro umělý přenos genetické informace mezi buňkami pomocí metod genového inženýrství 4. Varianty vstupu do posloupnosti, chemická syntéza DNA, biochemická syntéza DNA (PCR, reverzní transkripce, RTPCR) 5. Metody izolace DNA (RNA) z virů, organel a buněk 6. Metody degradace DNA (mechanická, enzymová, restrikční endonukleázy) 7. Enzymy pro syntézu, modifikace, spojování a úpravy konců DNA 8. Rekombinace fragmentů s vektorem in vitro 9. Vnášení DNA do organismů (infekce, indukovaná fúze, transformace, transdukce) 1O.-11. Genové inženýrství u bakterií na příkladu E. coli. Virové a plazmidové vektory, strategie klonování, sekvencování, transkripce, exprese cizorodých genů, knihovnictví, cílená mutageneze, amplifikace DNA, selekce transformovaných klonů, konstrukce speciálních vektorů 12. -13.Genové inženýrství u kvasinek na příkladu S. cerevisiae, vektory, strategie využití podvojných vektorů, exprese, sekrece, YAC vektory, knihovnictví, genové manipulace in vitro (integrativní vektory), léčení genetických chorob, izolace genů, cílená mutageneze in vitro, manipulace na úrovni in vivo 14. Specifické rysy genových manipulací u mnohobuněčných organismů Příprava dsRNA a umlčování genů pomocí RNA interference,genová terapie Last update: Vopálenský Václav, Mgr., Ph.D. (28.08.2017)
|