Aktivace TRPV1 receptorů má důležitou roli při pro vnímání bolesti. Zdá se, že funkce TRPV1 může být modulována jeho komunikací s mu-opioidním receptorem (MOR) a Toll-like receptorem 4 (TLR4). Byl pozorován také cross-talk mezi signálními kaskádami regulovanými MOR. Vzájemné interakce mezi těmito receptory a jejich signálními drahami však nejsou dobře známy. Hlavním cílem tohoto projektu bude zkoumat účinky specifických ligandů na chování a funkci těchto tří membránově vázaných receptorů, které se podílejí na zpracování bolestivých podnětů. S využitím fluorescenčních mikroskopických technik jako FRAP, FLIM-FRET nebo BRET budeme monitorovat laterální mobilitu receptorů v plazmatické membráně, dynamiku jejich internalizace a relevantní protein-proteinové interakce v definovaných in vitro podmínkách. Bude zkoumána také úloha lkíčových molekulárních partnerů těchto receptorů (např. G proteinů, β-arrestinu nebo GRKs). Za tímto účelem bude potlačena exprese vybraných molekul pomocí specifických siRNAs. Výsledky tohoto výzkumu mohou pomoci odhalit detaily molekulárních interakcí mezi between MOR, TLR4 a TRPV1.
Preliminary scope of work in English
Activation of transient receptor potential V1 (TRPV1) is critical for pain sensation. There are some indications that the function of TRPV1 can be modulated through its communication with the μ-opioid receptor (MOR) and Toll-like receptor 4 (TLR4). In addition, cross-talk between signaling cascades regulated by MOR and TLR4 has also been noted. Nevertheless, the mutual interactions between all these receptors and their signaling pathways are still not well understood. The main goal of the present project is to investigate the effects of different specific ligands on the behavior and function of these three membrane-bound receptors, which participate in processing of nociceptive stimuli. Using advanced fluorescence microscopy techniques such as FRAP (fluroescence recovery after photo-bleaching) and FLIM-FRET (fluorescence lifetime imaging-fluorescence resonance energy transfer) or BRET (bioluminescence resonance energy transfer) we will monitor receptor lateral mobility in the plasma membrane, dynamics of their internalization and relevant protein-protein interactions under controlled in vitro conditions. The role of key molecular partners of these receptors (e.g., G proteins, β-arrestins or GRKs) will also be explored. For this purpose, selected molecules will be knock-downed by specific siRNAs. Results of this research may help to unravel the details of the molecular interactions between MOR, TLR4 and TRPV1.
- assigned by the advisor