Analýza zotavování membránového potenciálu kvasinek za stresových podmínek vyvolaných protonoforem CCCP
| Thesis title in Czech: | Analýza zotavování membránového potenciálu kvasinek za stresových podmínek vyvolaných protonoforem CCCP |
|---|---|
| Thesis title in English: | The analysis of membrane potential recovery in yeast under CCCP-induced stress |
| Key words: | kvasinky; Saccharomyces cerevisiae; vnitrobuněčné pH; membránový potenciál; pHluorin; dis-C3(3); CCCP; stres; fluorescence |
| English key words: | yeast; Saccharomyces cerevisiae; intracellular pH; membrane potential; pHluorin; dis-C3(3); CCCP; stress; fluorescence |
| Academic year of topic announcement: | 2017/2018 |
| Thesis type: | rigorosum thesis |
| Thesis language: | čeština |
| Department: | Department of Macromolecular Physics (32-KMF) |
| Supervisor: | prof. RNDr. Jaromír Plášek, CSc. |
| Author: | hidden - assigned and confirmed by the Study Dept. |
| Date of registration: | 04.01.2018 |
| Date of assignment: | 04.01.2018 |
| Confirmed by Study dept. on: | 04.01.2018 |
| Date and time of defence: | 09.05.2018 00:00 |
| Date of electronic submission: | 04.01.2018 |
| Date of submission of printed version: | 04.01.2018 |
| Date of proceeded defence: | 09.05.2018 |
| Guidelines |
| 1. Navrhnout a optimalizovat metodu sledování časového vývoje intracelulárního pH kvasinek obsahujících pHluorin s využitím fluorimetru Fluoromax3 a “Multigroup Acquisition” módu.
2. Kalibrace vztahu mezi vlnovou délkou maxima emise sondy diS-C3(3) a mírou reálné depolarizace kvasinek v suspenzích stanovené metodou synchronně skenované fluorescence 3. Detailní popis průběhu zotavování membránového potenciálu kvasinek za stresových podmínek vyvolaných protonoforem CCCP zahrnující: a) analýzu vývoje intracelulárního pH po aplikaci CCCP, včetně závislosti tohoto efektu na koncentraci CCCP, b) vztah mezi poklesem ustálené hodnoty membránového potenciálu, koncentrací protonoforu CCCP a intracelulárním pH, c) vliv koncentrace extracelulárního draslíku na reakci kvasinek na přidání CCCP, d) porovnání chování buněk sklizených v různých růstových fázích, od raně exponenciální po stacionární. |
| References |
| Alberts et al. edit. Molecular Biology of the Cell, 5th edition, Garland Science, New York, 2008; vybrane kapitoly.
Feldmann, H. Yeast: Molecular and Cell Biology. J. Wiley & Sons, 2010. Lakowicz, J. R. Principles of fluorescence spectroscopy, 3rd edition, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York , 2006 Sted-Knudsen, O . Biological Membranes, Cambridge University Press, Cambridge, 2002. Tsien, R.Y.: The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67 (1998): 509-544. Vo-Dinh, T. (1981) Synchronous excitation spectroscopy, in Modern Fluorescence Spectroscopy, Vol. 4 (E.C. Wehry, Ed.), Plenum Press, New York, pp. 167-192. Plášek J, Gášková D, Ludwig J, Höfer M.: Early changes in membrane potential of Saccharomyces cerevisiae induced by varying extracellular K+, Na+ or H+ concentrations. J. Bioenerg. Biomembr. 45 (2013 ) 45:561–568. Drietomska A et al. Interplay of Tok1p K+ channel and H+-ATPase in yeast Saccharomyces cerevisiae membrane potential response to CCCP-induced stress: dependence on growth phase (rukopis článku v recenzním řízení) Aktuální časopisecká literatura doporučená vedoucím. |