Akrozom je typickou organelou spermií. Tato organela obsahuje proteolytické enzymy (např. akrozin, hyaluronidáza, neuraminidáza, β-N-acetylglukosaminidáza atd.), které se účastní štěpení glykoproteinových obalů oocytu. Spermie pak snadno pronikne obalem a dojde k oplození. Tento tradiční pohled je v současné době překonaný (viz. diplomová práce T. Otčenáškové, 2019) a ukazuje se, že akrozom obsahuje více jak 500 bílkovin, které jsou součástí různých metabolických drah a biologických procesů. Cílem této diplomové práce je detailní charakterizace akrozomálních proteinů u myši domácí a několika dalších druhů rodu Apodemus a zda tyto proteiny tvoří funkční celky (např. proteazomální podjednotky versus proteasom), nebo jsou spíše odpadem po předešlém procesu zrání spermií. Akrozomální bílkoviny budeme získávat simulovanou kapacitací a akrozomální reakcí s kalciovým ionoforem. Pro detailní charakterizaci bílkovin použijeme metody hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS), pro vizualizaci struktur (např. proteazom) použijeme elektronovou mikroskopii příp. metody nepřímé fluorescence. Následně bude s pomocí inhibitorů (např. proteazomu) role těchto struktur v procesu oplození ověřována metodou oplození in vitro.
- assigned by the advisor