Příprava lidské Ca2+/kalmodulin-dependentní proteinkinasy kinasy 2 fosforylované na Ser100 a Ser511

• Thesis title in Czech: Příprava lidské Ca2+/kalmodulin-dependentní proteinkinasy kinasy 2 fosforylované na Ser100 a Ser511
• Thesis title in English: Preparation of human Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2 phosphorylated at Ser100 and Ser511
• Key words: Ca2+/kalmodulin-dependentní proteinkinasa, proteinkinasa, fosforylace
• English key words: Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase, protein kinase, phosphorylation
• Academic year of topic announcement: 2018/2019
• Thesis type: Bachelor's thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Physical and Macromolecular Chemistry (31-260)
• Supervisor: prof. RNDr. Tomáš Obšil, Ph.D.
• Author: hidden - assigned by the advisor
• Date of registration: 17.10.2018
• Date of assignment: 17.10.2018
• Date of electronic submission: 27.05.2019
• Date of proceeded defence: 11.06.2019
• Opponents: RNDr. Jiří Pavlíček, Ph.D.

Preliminary scope of work

Hlavním úkolem práce bude příprava lidské CaMKK2 (mutantní formy obsahující buď čtyři fosforylační místa Ser100, Thr145, Ser495 a Ser511; nebo dvě fosforylační místa Ser100 a Ser511) expresí v bakteriích E. coli a její následná purifikace založená na afinitní a gelové permeační chromatografii. Připravený protein bude následně fosforylován pomocí katalytické podkednotky cAMP-dependentní proteinkinasy A (PKA). Fosforylace bude monitorována pomocí phos-tag SDS-PAGE a hmotové spektrometrie. Fosforylační protokol bude optimalizován tak, aby došlo ke kvantitativní fosforylaci CaMKK2 na Ser100 a Ser511. S připraveným fosforylovaným proteinem budou následně prováděny další biofyzikální studie.