Měření intracelulárního pHi kvasinek S. cerevisiae v koloniích na agaru v Petriho miskách.
| Thesis title in Czech: | Měření intracelulárního pHi kvasinek S. cerevisiae v koloniích na agaru v Petriho miskách. |
|---|---|
| Thesis title in English: | Measurement of intracellular pHi of S. cerevisiae yeast in colonies on agar plates in Petri dishes |
| Key words: | kvasinky; Saccharomyces cerevisiae; vnitrobuněčné pH; pHluorin; kolonie; fluorescence; mikroskopie |
| English key words: | yeast; Saccharomyces cerevisiae; intracellular pH; pHluorin; colonies; fluorescence; microscopy |
| Academic year of topic announcement: | 2021/2022 |
| Thesis type: | Bachelor's thesis |
| Thesis language: | |
| Department: | Institute of Physics of Charles University (32-FUUK) |
| Supervisor: | prof. RNDr. Jaromír Plášek, CSc. |
| Author: | |
| Advisors: | Mgr. Iva Jančíková, Ph.D. |
| prof. RNDr. Petr Heřman, CSc. | |
| Guidelines |
| 1.Osvojit si základní techniky práce v mikrobiologické laboratoři, kultivaci bakterií a kvasinek
2.Zvládnout základy fluorescenční spektroskopie a seznámit se s metodou měření intracelulárního pHi kvasinek pomocí fluorescenčního proteinu pHluorinu. 3.Podílet se na konstrukci světlovodného propojení fluorimetru Fluoromax3 s fluorescenčním mikroskopem Olympus IX70 4.Navrhnout a ověřit protokol pro měření pHi kvasinek v koloniích na agarovém médiu pomocí mikrospektrofluorimetru s objektivy s velkou pracovní vzdáleností. 5.Analyzovat prostorovou distribuci pHi kvasinek v koloniích. |
| References |
| Alberts et al. edit. Molecular Biology of the Cell, 5th edition, Garland Science, New York, 2008; vybrane kapitoly.
Feldmann, H. (2010) Yeast: Molecular and Cell Biology. J. Wiley & Sons, 2010. Lakowicz, J. R. Principles of fluorescence spectroscopy, 3rd edition, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York , 2006; vybrané kapitoly Murphy, D.B., Davidson M.W.: Fundamentals of light microscopy and electronic imaging. 2nd edition, Wiley-Blackwell, Hoboken, New Jersey, 2013. Plášek, J., Melcrová., A, Gášková., D.: Enhanced Sensitivity of pHluorin-Based Monitoring of Intracellular pH Changes Achieved through Synchronously Scanned Fluorescence Spectra. Anal. Chem. 87 (2015) 9600 – 9604. Aktuální časopisecká literatura doporučená vedoucím. |
| Preliminary scope of work |
| Udržování stabilní hodnoty intracelulárního pHi je důležitým aspektem fyziologie kvasinek. Z toho přirozeně vyplývá velký význam spolehlivých metod měření tohoto buněčného parametru. V rámci předcházející diiplomové prace A. Melcerové byla vyvinuta a publikována nová metoda měření pHi kvasinek značených fluorescenčním proteinem pHluorinem (A. Melcrová et al, viz Anal. Chem. 87 (2015) 9600 – 9604). Tato metoda byla v rámci navazující diplomové práci D. Babuky úspěšně použita při studiu acidifikace cytosolu kvasinek vyvolané protonoforem CCCP. Získané výsledky byly již publikovány ve dvou pracích (D. Babuka et al. J. Bioenerg. Biomembr.49 (2017) 273–279; D. Babuka et al. J. Bioenerg. Biomembr.49 (2017) 391-397) a třetí publikace je před dokončením (D. Babuka et. al. Antagonistic Effect of Salts on Weak Acids Food Preservation: Physico-Chemical Background).
Nově vypsaná bakalářská práce navazuje na dvě výše uvedené diplomové práce s cílem získat pomocí mikrospektrofluorimetrie informace o distribuci pHi v buněčných koloniích na agaru v Petriho miskách. |