Vliv vybraných zánětlivých agens na proces osteoklastogeneze

• Thesis title in Czech: Vliv vybraných zánětlivých agens na proces osteoklastogeneze
• Thesis title in English: Effect of selected inflammatory agents on the osteoclastogenesis
• Key words: osteoklast, osteoklastogeneze, osteoporóza, zánět, zánětlivá onemocnění, celiakie, TNF-α, IL-6, IFN-γ, cfDNA
• English key words: osteoclast, osteoclastogenesis, osteoporosis, inflammation, inflammatory diseases, celiac disease, TNF-α, IL-6, IFN-γ, cfDNA
• Academic year of topic announcement: 2016/2017
• Thesis type: diploma thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Anthropology and Human Genetics (31-110)
• Supervisor: RNDr. Pavlína Daňková, Ph.D.
• Author: Mgr. Patrik Škubica - assigned by the advisor
• Date of registration: 21.11.2016
• Date of assignment: 21.11.2016
• Date of electronic submission: 10.08.2018
• Date of proceeded defence: 11.09.2018
• Opponents: MUDr. Markéta Hušáková, Ph.D.

Preliminary scope of work

Osteoporóza je chronické onemocnění postihující 7-10 % populace ČR, která se vyznačuje snížením kostní denzity a zvýšeným rizikem zlomenin. Celiakie je autoimunitní chronické onemocnění sliznice tenkého střeva způsobené přecitlivělostí na lepek. Ačkoliv byla vysoká koincidence těchto onemocnění dříve chápána jako důsledek snížení absorpce živin ze stravy (kalcia, vitamínu D) z důvodu střevního zánětu, dnes už se předpokládá jiný mechanismus.
Cirkulující monocyty mohou sloužit jako prekurzory pro osteoklasty, tedy mnohojaderné buňky odpovědné za kostní resorpci. Během 14ti denní stimulace monocytů pomocí M-CSF a RANKL lze získat in vitro osteoklasty, jejichž identifikace probíhá především pomocí TRAcP barvení a světelného mikroskopu.
Cílem diplomové práce je zmapovat změny v diferenciaci osteoklastů působením specifických cytokinů, které jsou typické pro mikroprostředí celiakie a pravděpodobně souvisí se zánětlivými procesy probíhajícími ve střevní sliznici. U některých z nich (IFNy, TNF, IL-6) byl prokázán vliv na diferenciaci monocytů v osteoklasty. Pro simulaci mikroprostředí u pacientů s celiakií budou monocyty v průběhu diferenciace stimulovány také pomocí volné DNA, u které se předpokládá zvýšená hladina v séru celiakálních pacientů z důvodu zánětlivých procesů ve střevě. Cílem DP je tedy ověřit in vitro, zda mikroprostředí celiakie může ovlivnit schopnost monocytů diferencovat v osteoklasty, ať již pozitivně nebo negativně, a v případě pozitivní regulace osteoklastogeneze tak napomáhat častému rozvoji osteoporózy u pacientů s celiakií.
Student si mimo jiné osvojí následující techniky: Buněčné kultury, separace monocytů z plné krve, diferenciace monocytů v osteoklasty, fluorescenční imunohistochemické barvení, izolace DNA, RNA, genotypizace, QPCR