Studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk Xenopus tropicalis in vitro.

• Thesis title in Czech: Studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk Xenopus tropicalis in vitro.
• Thesis title in English: In vitro study of differential potential of Xenopus tropicalis Sertoli stem cells.
• Key words: Xenopus, kmenové buňky, diferenciace.
• English key words: Xenopus, stem cells, differentiation.
• Academic year of topic announcement: 2024/2025
• Thesis type: rigorosum thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Cell Biology (31-151)
• Author: hidden - assigned and confirmed by the Study Dept.
• Date of registration: 14.10.2015
• Date of assignment: 14.10.2015
• Confirmed by Study dept. on: 25.03.2025
• Date of electronic submission: 16.09.2024
• Date of proceeded defence: 01.04.2025

Preliminary scope of work

Cílem disertační práce je studium diferenciačního potenciálu Sertoliho kmenových buněk (XTSSC) a Sertoliho kmenových buněk exprimujících RFP (XTSSC-RFP) žáby druhu X. tropicalis pomocí diferenciačních faktorů neuroektodermu, mesodermu a entodermu. Embryoidní tělíska XTSSC a XTSSC-RFP budou připravována kultivační metodou zavěšené kapky. Poté budou embryoidní tělíska kultivována v médiu obsahující vybrané růstové faktory: insulin, transferin, selen pro neuroektoderm; aktivin A, kyselina retinová, bazický FGF pro mesoderm a mix růstových gaktorů N2 a B27 společně s přídavkem nikotinamidu a bFGF pro entoderm. Stav diferenciace u takto kultivovaných XTSSC a XTSSC-RFP bude potvrzován pomocí qPCR a imunocytohistochemického barvení využívající specifické markery pro jednotlivé zárodečné listy a jejich deriváty (Msi1, nestin, Gata4, Kdr, atd.). Pro konečné potvrzení stavu diferenciace takto připravených buněk X. tropicalis bude provedena jejich transplantace do blastocoelu či perotoneální dutiny pulců stejného druhu.

Preliminary scope of work in English

The purpose of this project is to study in vitro X. tropicalis Sertoli stem cell (XTSSC) and RFP positive X. tropicalis Sertoli stem cell (XTSSC-RFP) differentiation potential range using neuroectoderm, mesoderm and entoderm differentiation factors. Hanging drop techniques will be employed to form embryoid bodies derived from XTSSC and XTSSC-RFP. After that embryoid bodies will be cultivated in the medium enriched with selected growth factors: neuroectoderm - insulin, transferrin, selenium chloride, mesoderm – activing A, retinoic acid, bFGF, entoderm - N2, B27 a bFGF, nicotinamide. Differentiation status will be evaluated using qPCR and immunohistochemistry analysis utilizing ectodermal specific marker Msi1, neuroectodermal markers - Nestin (Nes), Synaptophysin (Syp) and Dopamine receptor D2 (Drd2), endodermal markers - Gata4 or von Willebrand factor -Vwf and mesodermal marker Kdr (kinase insert domain receptor). Finally XTSSC and XTSSC-RFP differentiation potential range will be confirmed via allogeneic microinjections of embryoid bodies before and after in vitro differentiation into blastocoel or tadpole´s peritoneal cavity.