Pilotní studie terapeuticky využitelného mechanismu imunogenní smrti metastázovaného melanomu

• Thesis title in Czech: Pilotní studie terapeuticky využitelného mechanismu imunogenní smrti metastázovaného melanomu
• Thesis title in English: Pilot study of a therapeutically exploitable mechanism of immunogenic death in metastatic melanoma
• Key words: mechanická buněčná smrt, makrofágy, THP-1, CLASP, inhibitor B-Raf, zánět, rakovina, imunitní odpověď, CXCL10
• English key words: mechanical cell death, macrophages, THP-1, CLASP, B-Raf inhibitor, inflammation, cancer, immune response, CXCL10
• Academic year of topic announcement: 2023/2024
• Thesis type: diploma thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Cell Biology (31-151)
• Supervisor: Larisa Labzin, Ph.D.
• Author: hidden - assigned and confirmed by the Study Dept.
• Date of registration: 14.06.2024
• Date of assignment: 14.06.2024
• Date of electronic submission: 08.08.2024
• Date of proceeded defence: 10.09.2024
• Opponents: prof. PharmDr. Jitka Palich Fučíková, Ph.D.

Preliminary scope of work

Molekulární pochopení rozdílů mezi pyroptózou, nekroptózou a apoptózou je klíčové pro odhalení cesty, kterou se imunitní specializované buněčné makrofágy chovají v odlišných prostředích a reagují na umírající buňky. Přesný mechanismus však zůstává nejasný. K zodpovězení této otázky byl supernatant z fyzikálně indukované mechanické smrti 1205Lu melanomových buněk přenesen na THP-1 makrofágy po dobu 16 hodin. Exprese cytokinů makrofágy byla měřena pomocí ELISA a reverzní transkripční PCR ve dvou různých časových bodech po expozici supernatantu. Pro srovnání THP-1 odpovědi vnímajících melanomové buňky umírající na mechanický tlak po knockdownu CLASP s melanomovými buňkami umírajícími na apoptózu byly k indukci apoptózy u rakovinných buněk 1205Lu použity dobře popsané induktory B-Raf inhibitor a staurosporin. Aby se efektivně zabily melanomové buňky a zachovaly makrofágy, byl proveden test závislosti odpovědi na dávce induktoru s následným testem buněčné smrti. Uvolňování CXCL10 bylo pozorováno specificky z makrofágů vystavených CLASP knockdown komprimovaným 1205Lu melanomovým buňkám, což ukazuje na prozánětlivý stav a rozpoznání makrofágy THP-1. Dále jsme chtěli zjistit, zda buněčná smrt závislá na Clasp indukuje aktivaci THP-1 efektivněji než inhibitory B-Raf, které jsou současnou standardní léčbou melanomu, a staurosporin, který indukuje apoptózu. Proto jsme provedli test dávkové odezvy inhibitorů B-Raf a staurosporinu na melanomových buňkách a buňkách THP-1 a měřili buněčnou smrt u které umírají melanomové buňky ale makrofágy jsou zachovány živé. Staurosporinem ošetřené buňky melanomu nevyvolaly zánětlivou reakci makrofágů. Naopak, knockdown CLASP (KD) a následná komprese buněk vedou k mechanické buněčné smrti a spouštějí odpověď makrofágů. To může být významným zjištěním, pokud jde o povolání imunitních buněk do místa rakoviny. Tato zjištění pomáhají objasnit roli makrofágů při vnímání umírajících melanomových buněk a mohla by poskytnout další léčbu v kombinaci se současnou terapií rakoviny.