Inhibitory Mdm2 a p53 v buňkách akutní myeloidní leukemie

• Thesis title in Czech: Inhibitory Mdm2 a p53 v buňkách akutní myeloidní leukemie
• Thesis title in English: Mdm2/p53 inhibitors in acute myeloid leukemia
• Key words: AML, RITA, RG7112, p53-Mdm2 interakce, exosomy, inhibitory p53-Mdm2 interakce
• English key words: AML, RITA, RG7112, p53-Mdm2 interaction, exosomes, inhibitors of p53-Mdm2 interaction
• Academic year of topic announcement: 2022/2023
• Thesis type: diploma thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Genetics and Microbiology (31-140)
• Supervisor: Mgr. Barbora Brodská, Ph.D.
• Author: hidden - assigned and confirmed by the Study Dept.
• Date of registration: 21.10.2022
• Date of assignment: 22.10.2022
• Confirmed by Study dept. on: 27.01.2023
• Date of electronic submission: 04.08.2024
• Date of proceeded defence: 16.09.2024
• Opponents: Mgr. Dita Strachotová, Ph.D.
• Advisors: RNDr. Tereza Hrdinová, Ph.D.

Preliminary scope of work

Ubikvitin ligáza Mdm2 je hlavním regulátorem stability a aktivity tumor supresoru p53, zásadního proteinu ovlivňujícího buněčnou proliferaci a apoptózu. Tyto proteiny spolu interagují svými N-konci, na nichž se nacházejí domény důležité pro jejich aktivitu, a zároveň středovými oblastmi, které zprostředkují několikanásobnou ubikvitinylaci p53 a jeho degradaci. Inhibice Mdm2-p53 interakce má za následek zvýšení exprese a aktivity p53, změny v buněčném cyklu a apoptóze. Cílem diplomové práce je analyzovat účinek inhibitorů Mdm2-p53 interakce (Nutlin-3A, RITA a další) na buňky akutní myeloidní leukémie (AML). Předběžné výsledky ukazují, že zatímco Nutlin-3A, který se váže k N-terminální doméně Mdm2, způsobuje především zástavu buněčného cyklu, RITA vázající se k N-koncové doméně p53 má za následek rozsáhlou apoptózu. Účinek RITA na AML linie, stejně jako na buňky jiných typů nádorů, je heterogenní a důvod této heterogenity není znám. Jedním z dílčích cílů práce je proto analýza efektu kokultivace rezistentních linií s exosomy izolovanými ze senzitivní linie, případně z kultury RITA-senzitivních buněk získaných od AML pacientů.
Viabilita buněk bude sledována pomocí průtokového cytometru, rozsah apoptózy bude určen na základě Western-blotové analýzy exprese proteinů souvisejících s apoptózou, vstup exosomů do buněk bude pozorován konfokálním mikroskopem. Transkripční aktivita p53 bude monitorována pomocí úrovně její specifické fosforylace a qPCR analýzou vybraných genů. Vliv jednotlivých inhibitorů na interakci p53 s Mdm2 a dalšími interakčními partnery bude studován imunoprecipitací.