Vliv NADPH oxidázy na architekturu a funkci β buněk a Langerhansových ostrůvků

• Thesis title in Czech: Vliv NADPH oxidázy na architekturu a funkci β buněk a Langerhansových ostrůvků
• Thesis title in English: The role of NADPH oxidase in architecture and function of β cells and Langerhans Islets
• Key words: NADPH oxidáza, NOX4, β buňky, diabetes, redoxní signalizace, Langerhansovy ostrůvky, reaktivní formy kyslíku
• English key words: NADPH oxidase, NOX4, β cells, diabetes, redox signaling, Langerhans islets, reactive oxygen species
• Academic year of topic announcement: 2018/2019
• Thesis type: diploma thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Cell Biology (31-151)
• Supervisor: RNDr. Lydie Plecitá, Ph.D.
• Author: Mgr. Štěpánka Benáková - assigned by the advisor, waiting for guarantor's approval
• Date of registration: 19.11.2018
• Date of assignment: 19.11.2018
• Date of electronic submission: 03.06.2020
• Date of proceeded defence: 14.07.2020
• Opponents: Mgr. Kristina Bardová, Ph.D.

Preliminary scope of work

Na procesu výlevu inzulinu z β buněk se podílí mnoho molekul buněčného metabolismu. Dosud je nejméně objasněn vliv redoxní rovnováhy. Objektem našeho zájmu je signalizace pomocí endogenních reaktivních kyslíkových radikálů (ROS) z NADPH oxidázy izoformy 4 (NOX4). Výsledky studující laboratoře ukázaly, že NOX4 se podílí na výlevu inzulinu, glukózové homeostáze a endokrinní i parakrinní signalizaci β buněk Langerhansových ostrůvků (LO). Předpokládá se, že NOX4 aktivita by mohla mít dále vliv na maturaci β buněk, složení a architekturu LO. Cílem diplomové práce by mělo být ověření těchto hypotéz, objasnění vlivu narušení redoxní rovnováhy na architekturu LO a funkčnost endokrinních buněk v závislosti na stáří, přítomnosti proteinu NOX4 a různých nutričních zdrojích.
Charakterizace LO slinivky proběhne imunohistologickými technikami, kde budeme sledovat hormony endokrinních buněk a proteiny glukózové senzorické dráhy. Dospělá zvířata budou po odstavu rozdělena do skupin krmených klasickou, na sacharidy bohatou a speciální vysokotukovou stravou a taktéž dle věku (právě odstavená mláďata, dospělí jedinci a popř. staří). Paralelně budeme sledovat chování INS1-E buněk (kontroly, NOX4 silencovaných a NOX4 overexprimovaných) bez či po indukci glukózou. Expresi genů zkontrolujeme analýzou RT-PCR a proteinovou imunodetekcí pomocí Western blotu (s kontrolním genem a produktem NOX4).