Genotoxic stress and senescence in tumour cells: impact on the tumour growth and anti-tumour immunity.

• Thesis title in Czech: Genotoxický stres a senescence nádorových buněk; dopad na růst nádorů a protinádorovou imunitu.
• Thesis title in English: Genotoxic stress and senescence in tumour cells: impact on the tumour growth and anti-tumour immunity.
• Key words: Genotoxický stres; buněčná senescence; protinádorová imunita
• English key words: Genotoxic stress; cellular senescence; anti-tumour immunity
• Academic year of topic announcement: 2015/2016
• Thesis type: dissertation
• Thesis language: angličtina
• Department: Department of Cell Biology (31-151)
• Supervisor: RNDr. Milan Reiniš, CSc.
• Author: hidden - assigned by the advisor
• Date of registration: 04.11.2015
• Date of assignment: 04.11.2015
• Date of electronic submission: 19.11.2020
• Date of proceeded defence: 10.02.2021
• Opponents: prof. RNDr. Jan Brábek, Ph.D.

Preliminary scope of work

Projekt je zaměřen na objasnění mechanismů, kterými nádorové buňky, u nichž byla indukována senescence různými mechanismy (chemoterapií včetně epigenetickými agens, cytokiny), mohou ovlivnit růst nádorů, protinádorovou imunitu a také protumorigenní imunosupresi) na protinádorovou imunitu. Cílem projektu je pomocí in vivo a in vitro experimentů objasnit, jak buněčný stres ovlivňuje expresi vybraných imunoaktivních molekul a následně interakce nádorových buněk s jednotlivými buněčnými populacemi imunitního systému (T, NK, dendritickými a supresorickými buňkami). Zvláštní pozornost bude věnovány parakrinním efektům cytokinů a dalších secernovaných proteinů produkovanými stresovanými buňkami v mikroprostředí nádoru.
Hlavními metodami v těchto studiích budou fenotypová analýza nádorových buněk pomocí průtokové cytometrie a konfokální mikroskopie, analýzy sekretovaných proteinů, analýzy genové exprese na úrovních RNA a proteinu (multiplex qPCR, ELISA, western blot), analýza interakcí mezi nádorovými buňkami a vybranými buňkami imunitního systému (proliferační a cytotoxické testy), in vivo experimenty na myších nesoucích transplantované syngenní nádory a na transgenních myších se spontánními nádory a monitorování imunitní odpovědi u myší (vícebarevná průtoková cytometrie, ELISPOT).

Preliminary scope of work in English

This project is focused on elucidation how senescent tumour cells, induced by distinct genotoxic treatments (chemotherapy including the epigenetic agents, cytokines) can influence the tumour growth, anti-tumour immunity and, especially, protumorigenic immune suppression. The objective of the in vivo and in vitro experiments is to reveal how the cellular stress can drive expression of selected immunoactive molecules, and consequently tumour cells interactions with particular immune cell lineages (T, NK, dendritic and suppressor cells). Special attention will be paid to the paracrine effects of the cytokines, and other soluble proteins produced by stressed cells on the tumour microenvironment.
The principle methods used in these studies will be tumour cell phenotypic analysis by flow cytometry and confocal microscopy, analysis of secreted proteins, analysis of the gene expression at the RNA and protein levels (multiplex qPCR, ELISA, Western blot), analysis of interactions between tumour and immune cells (proliferation and cytotoxic tests), in vivo experiments using mice transplanted with syngeneic tumour cells, as well as transgenic mice developing spontaneous tumours, and monitoring of the immune responses in mice (multicolour flow cytometry, ELISPOT).