Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy

• Thesis title in Czech: Separace a stanovení možných produktů enzymového štěpení 4-nitrofenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobiosidu pomocí kapilární elektroforézy
• Thesis title in English: Separation and determination of possible products of enzymatic cleavage of 4-nitrophenyl-N,N'-diacetyl-β-D-chitobioside using capillary electrophoresis
• Key words: kapilární elektroforéza, sacharidy, enzymová kinetika, beta-N-acetylhexosaminidasa
• English key words: capillary electrophoresis, saccharides, enzyme kinetics, beta-N-acetylhexosaminidase
• Academic year of topic announcement: 2011/2012
• Thesis type: Bachelor's thesis
• Thesis language: čeština
• Department: Department of Analytical Chemistry (31-230)
• Supervisor: doc. RNDr. Tomáš Křížek, Ph.D.
• Author: hidden - assigned by the advisor
• Date of registration: 08.11.2011
• Date of assignment: 08.11.2011
• Date of electronic submission: 31.05.2012
• Date of proceeded defence: 19.06.2012
• Opponents: doc. RNDr. Květa Kalíková, Ph.D.
• Advisors: prof. RNDr. Pavel Coufal, Ph.D.

Preliminary scope of work

Cílem práce bude vývoj a optimalizace elektroforetické separace produktů, které mohou vznikat hydrolýzou 4-nitrofenyl-N,N’-diacetyl-β-D-chitobiosidu enzymem β-N-acetylhexosaminidasou. K vývoji metody bude využita kapilární zónová elektroforéza s přímou UV detekcí. Nejprve budou optimalizovány podmínky separace, především složení základního elektrolytu, jeho pH a iontová síla. Poté bude u optimalizované metody otestována reprodukovatelnost měření, limity detekce apod. Vyvinutá metoda bude sloužit k porovnání aktivity enzymů při hydrolýze přirozeného substrátu a tzv. chromogenního substrátu, který se často při studiu enzymové kinetiky používá.

Preliminary scope of work in English

The aim of this work is development and optimization of electrophoretic separation of products that can arise from hydrolysis of 4-nitrophenyl-N,N’-diacetyl-β-D-chitobioside by β-N-acetylhexosaminidase enzyme. For development of the method, capillary electrophoresis with direct UV detection will be employed. At first, separation conditions will be optimized, namely background electrolyte composition, pH and ionic strength. Subsequently, reproducibility of the optimized method, limits of detection etc. will be tested. The developed method will serve for comparison of enzymatic activity towards natural substrate and chromogenic substrate, that is frequently used for enzyme kinetics studies.