Odezva membránového potenciálu a intracelulárního pH kvasinek na změny extracelulární koncentrace K+
| Název práce v češtině: | Odezva membránového potenciálu a intracelulárního pH kvasinek na změny extracelulární koncentrace K+ |
|---|---|
| Název v anglickém jazyce: | Response of plasma membrane potential and intracellular pH of yeast to changes in the concentration of extracellular K+ |
| Klíčová slova: | vnitrobuněčné pH, pHluorin, synchronně skenovaná fluorescence, membránový potenciál |
| Klíčová slova anglicky: | intracellular pH, pHluorin, synchronously scanned fluorescence, membrane potential |
| Akademický rok vypsání: | 2013/2014 |
| Typ práce: | bakalářská práce |
| Jazyk práce: | čeština |
| Ústav: | Fyzikální ústav UK (32-FUUK) |
| Vedoucí / školitel: | prof. RNDr. Jaromír Plášek, CSc. |
| Řešitel: | skrytý - zadáno a potvrzeno stud. odd. |
| Datum přihlášení: | 16.10.2013 |
| Datum zadání: | 21.10.2013 |
| Datum potvrzení stud. oddělením: | 23.05.2014 |
| Datum a čas obhajoby: | 17.06.2014 00:00 |
| Datum odevzdání elektronické podoby: | 23.05.2014 |
| Datum odevzdání tištěné podoby: | 23.05.2014 |
| Datum proběhlé obhajoby: | 17.06.2014 |
| Oponenti: | prof. RNDr. Petr Heřman, CSc. |
| Konzultanti: | doc. RNDr. Dana Gášková, CSc. |
| Zásady pro vypracování |
| 1. Zvládnout základy fluorescenční spektroskopie.
2. Zvládnout základní postupy přípravy kvasinkových kultur a vzorků pro fluorescenční testy. 3. Seznámit se se základy buněčné biologie kvasinek (s důrazem na membránový potenciál a regulaci intracelulárního pH). 4. Seznámit se s metodou měření změn membránového potenciálu kvasinek pomocí karbocyaninové fluorescenční sondy diS-C3(3). 5. Seznámit se s metodou měření změn intracelulárního pH kvasinek pomocí fluorescenčního proteinu pHluorinu. 6. Provést sérii simultánních měření změn membránovvého potenciálu a intracelulárního pH u kvasinek kmenů Saccharomyces cerevisiae BY4742 a BY4742+pHL vyvolaných zvyšováním koncentrace K+ v jejich suspenzích. |
| Seznam odborné literatury |
| Molecular Biology of the Cell, Fourth Ed. Alberts et al (vybrane kapitoly), 2002
Feldmann, H. (2010) Yeast: Molecular and Cell Biology. J. Wiley & Sons, 2010. Lakowicz, J. R. (1999) Principles of fluorescence spectroscopy, Second edition, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York Tsien, R.Y.: The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67 (1998): 509-544. Vo-Dinh, T. (1981) Synchronous excitation spectroscopy, in Modern Fluorescence Spectroscopy, Vol. 4 (E.C. Wehry, Ed.), Plenum Press, New York, pp. 167-192. Plášek J., Sigler K.: Slow fluorescent indicators of membrane potential: a survey of different approaches to probe response analysis, J. Photochem. Photobiol. B: Biology, 33 (1996) 101-124 Plášek J, Gášková D, Lichtenberg-Fraté H, Ludwig J, Höfer M.: Monitoring of real changes of plasma membrane potential by diS-C(3)(3) fluorescence in yeast cell suspensions. J. Bioenerg. Biomembr. 44 (2012) 559-69. Plášek J, Gášková D, Ludwig J, Höfer M.: Early changes in membrane potential of Saccharomyces cerevisiae induced by varying extracellular K+, Na + or H + concentrations. J. Bioenerg. Biomembr. (2013 ) [Epub ahead of print]. další časopisecká literatura dle pokynů vedoucího |
| Předběžná náplň práce |
| Kationické redistribuční fluorescenční barvivo 3,3'-dipropylthiadicarbocyanin,diS-C3(3), se osvědčilo jako sonda membránového potenciálu umožňující měřit změny membránového potenciálu kvasinek v absolutní škále (mV). Varianta zeleného fluorescenčního proteinu zvaná pHluorin umožňuje měřit intracelulární pH mutantních kmenů kvasinek obsahujících tento protein. Předběžné experimenty ukázaly, že depolarizace kvasinek vyvolaná zvyšováním koncentrace K+ v médiu je nad určitou mezní koncentrací K+ doprovázena také změnami intracelulárního pH. Cílem této práce bude získat reprodukovatelná data týkající se velikosti těchto provázaných jevů a pokusit se je interpretovat. |